Mise au point, optimisation et évaluation d'une méthode stéréologique d'analyse d'image pour la quantification des mélanines au niveau ultrastructural

par Éric Donois

Thèse de doctorat en Biologie et physiologie cellulaires

Sous la direction de Pierre Valembois.

Soutenue en 1998

à Bordeaux 1 .

mots clés

Résumé

Ce travail a consiste en l'elaboration d'une methode d'analyse d'image stereologique de quantification des melanines au niveau ultrastructural et l'evaluation de cette methode dans le cadre d'experiences in vitro. Dans un premier temps, nous avons mis au point un seuillage des niveaux de gris specifique de la melanine. Ce seuillage nomme sdd n'etant pas systematiquement utilisable, nous avons du elaborer un seuillage nomme sem dont deux variantes, sem1 et sem2, ont ete evaluees par comparaison au seuillage sdd : sem2 et sdd se sont montrees equivalents et sem1 a ete rejete. Apres avoir evalue sur le plan theorique, la validite de chaque parametre stereologique defini, nous avons valide une methode de solubilisation alcaline des pheomelanines sur coupes permettant la quantification des eu- et pheomelanines. Puis, l'evaluation de notre methode a debute par une experience de confrontation avec un dosage spectrophotometrique conventionnel. Aucune correlation n'a pu etre notee pour des raisons qui sont discutees. Notre methode a ensuite ete comparee a la methode hplc de reference actuelle. Une premiere comparaison chez des melanocytes malins humains a donne des resultats encourageants pour la melanine totale et decevants pour les eu- et pheomelanines. Par contre, chez des naevocytes et des melanocytes malins stimules, une correlation a ete observee pour les trois pigments, confirmant ainsi la principale hypothese emise a l'issue de la precedente etude, impliquant la faible teneur en melanines des melanocytes malins et/ou la specificite reduite de la solubilisation alcaline chez ces memes cellules. Cette methode devra donc etre validee chez des melanocytes epidermiques humains normaux, systeme dans lequel elle presente le plus d'interet. Cette methode presente l'avantage de requerir peu de cellules, de pouvoir s'appliquer a des suspensions cellulaires mixtes, d'estimer le nombre de melanosomes melanises, la maturation melanosomale et le volume de melanine par melanocyte.

Titre traduit

Elaboration, optimisation and appraisal of a stereogical image analysis method for the quantification of melanins at the ultrastructural level

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