Transfection de monocytes humains par le gène del'interféron-γ et optimisation de l'expression de protéïnes par des fibroblastes humains dans un contexte d'immunothérapie des cancers

par Laurence Ringenbach

Thèse de doctorat en Sciences vie santé

Sous la direction de Pierre Tiberghien.

Soutenue en 1998

à Besançon , dans le cadre de École doctorale Homme, environnement, santé (Besançon2000-2012) .

mots clés

• Monocytes
• Interférons gamma
• Transfection
• Cultures primaires
• Immunothérapie anticancéreuse
• Thérapie génique

Résumé

Complémentaire aux thérapies anticancéreuses traditionnelles, la thérapie biologique occupe-une place de pius en plus importante et les monocytes, principaux acteurs du système immunnairj i'^phques dans ia Lac antitumorale, sont des candidats intéressants pour l'immunothérapie auuptive. L'acti\;te cytotoxique de ces cellules à l'égard des cellules tumorales n'apparaii que lorsqu'elles sont activées et nous avons cherché à obtenir cette activation par transfection des monocytes humains avec différentes constructions contenant le gène de l'interféron-y. L'ExGen 500(B\ un nouveau vecteur chimique, a été utilisé pour réaliser ces transfections. La cytotoxicité a été mise en évidence à l'aide d'un test fonctionnel : le test clonogénique, coculture de monocytes transfectés et de cellules cibles en milieu semi solide. Certains transgènes ont permis d'obtenir une cytotoxicité égale ou supérieure à celle obtenue avec l'interféron-y drogue, et ceci principalement en présence de GM-CSF. Pourtant, même si l'effet de la cytokine est détectable et même si l'ARNm de l'interféron-y est toujours présent dans les monocytes transfectés, il n'a pas été possible de mettre en évidence de façon directe la protéine. Cela laisse donc supposer que les rendements de transfection sont faibles. Des monocytes s'activant de façon autocrine grâce au gène de l'interféron-y transfectés représentent une orientation possible pour l'immunothérapie adoptive. Dans une seconde partie, nous avons cherché à optimiser la transfection de fïbroblastes humains avec l'ExGen 500®. La production d'interféron-y par des cellules primaires pourrait être un modèle d'immunothérapie intéressant.

Titre traduit

Transfection of human monocytes \\ith thé interferon-y gène and optimisation of proteins production bv humart fibroblastes toward immunotherapy of cancer

Résumé

Human monocytes are major effectors in host defence Systems against cancer. Their antitumoral activity is dépendent upon two processes : recruitment and activation. One of the most powerful activators for thèse cel!s is interferon-y. We developed a gene transfert protocole withh different plasmids containing interferon-y gene and with a new chemical vector : ExGen 500® so as to obtain an efficient long lasting autocrine cytocidal activation in transfected monocytes. We show. By c!onogenic assays, that efficient transfection and tumoncidai activity can be obtained by this metbod in human monocytes. Although the proposed model must be improved before clinical use, interferon-y producing monocytes have potential for adoptive immunotherapy. The second part of this work shows that ExGen 500® can efficiently transfect gene in human fibrobilasts, and that could be interesting for a use in non adoptive imniunotherapy models