Clonage et caracterisation moleculaire d'une glycoproteine multifonctionnelle du champignon phytopathogene phytophthora parasitica var. Nicotianae

par François Villalba

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Marie-Thérèse Esquerré-Tugayé.

Soutenue en 1997

à Toulouse 3 .

mots clés

Résumé

Phytophthora parasitica var. Nicotianae est un oomycete responsable, chez le tabac, de la pourriture noire du collet. Une glycoproteine de 34 kda (cbel) a ete isolee a partir du mycelium de la race 0 avirulente sur la lignee 46. 8. A l'aide d'un serum polyclonal, cbel a ete localisee a la surface des hyphes ainsi que dans la paroi de zoospores enkystees. L'injection de la glycoproteine dans le mesophylle des feuilles de tabac sensibles et resistants entraine l'apparition de necroses ainsi que l'induction de l'expression de genes de defense dans les memes delais. Appliquee sur des sections de tiges, elle protege la plante face a une infection ulterieure par une race virulente du champignon. Cbel est codee par un gene unique dont l'adnc correspondant a ete clone. La partie peptidique de l'eliciteur est composee de deux domaines repetes riches en cysteine, separes par une region riche en serine et threonine. Chaque domaine de cbel presente une sequence proche de la sequence consensus des domaines de liaison a la cellulose (cbd) caracterises chez des cellulases fongiques. L'eliciteur se fixe a la cellulose cristalline et aux parois extraites de racines de tabacs. Il possede de plus une activite hemagglutinante. Ces resultats suggerent que cbel est impliquee dans l'adhesion des zoospores aux racines de l'hote. L'activite elicitrice d'un peptide correspondant au premier cbd de cbel a ete testee. Il induit l'expression de genes associes a la defense mais n'entraine pas l'apparition de necroses aux doses utilisees. Ceci semble indiquer que les epitopes responsables de l'induction de ces reponses peuvent etre dissocies. Des sequences homologues a cbel ont ete detectees dans les genomes de differents phytophthora puis amplifiees par pcr. La conservation de l'eliciteur parmi les champignons du genre phytophthora, son activite de reconnaissance ainsi que leur production in vitro suggere qu'il pourrait etre egalement important durant la vie saprophytique de ces champignons. Afin d'evaluer le role de cbel dans la biologie de phytophthora parasitica var. Nicotianae, des champignons transformes n'exprimant plus l'eliciteur ont ete obtenus par une strategie sens et antisens.

Titre traduit

Cloning and molecular characterization of a multi-fonctional glycoprotein to the phytopathogen fungus phytophthora parasitica var. Nicotianae

Pas de résumé disponible.