Contribution à la mise en évidence du rôle de la 3-hydroxy-3-méthylglutaryl-coenzyme à réductase dans la transformation cellulaire : étude de modèles cellulaires transfectés par l'ADNc de l'enzyme

par Sophie Séronie-Vivien

Thèse de doctorat en Biochimie fondamentale

Sous la direction de Georges Soula.

Soutenue en 1997

à Toulouse 3 .

mots clés

Résumé

Les derives isoprenoides sont des composes lipidiques essentiels a la proliferation et a la differenciation cellulaires. L'enzyme regulatrice de leur biosynthese est la 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme a reductase. Elle catalyse la reduction de l'hmg-coa en mevalonate, precurseur de tout compose isoprenoide. Des anomalies de regulation et d'expression de cette enzyme ont ete caracterisees dans des cellules et tissus tumoraux sans toutefois mettre en evidence le role reel de l'enzyme dans la croissance et la transformation tumorale. Nous avons aborde cette question en faisant exprimer sous le controle d'un promoteur constitutif l'adnc de l'hmg-coa reductase dans des modeles cellulaires de fibroblastes de peau humains et d'adenocarcinomes humains pulmonaire (a549) et mammaire (mcf-7). La transfection de l'adnc de l'hmg-coa reductase n'a pas provoque la transformation des cellules normales. Par contre, les cellules a549 et mcf-7 ont presente une reversion phenotypique spectaculaire. Cette reversion s'exprime par un ralentissement de la croissance avec allongement de la phase g0/g1 du cycle cellulaire, des modifications morphologiques accompagnees d'un remaniement du reseau d'actine du cytosquelette, une forte diminution de la clonogenicite en agar et une perte totale de la tumorogenicite in vivo. Cette reversion ne s'accompagne pas de surexpression de l'activite enzymatique totale de l'hmg-coa reductase. Cependant, elle est specifique de l'expression de la proteine exogene comme a permis de le mettre en evidence l'utilisation d'un adnc de l'hmg-coa reductase delete du codon d'initiation de la traduction. En outre, elle ne se produit que si l'enzyme est fonctionnelle. En effet, grace entre autres a l'elaboration d'une hmg-coa reductase inactivee par mutation de son site catalytique, nous avons verifie que la reversion phenotypique observee est la consequence de la synthese de mevalonate par l'hmg-coa reductase transfectee. Notre travail est un argument supplementaire en faveur d'un role important de la regulation du metabolisme du mevalonate sur le controle du phenotype tumoral

Titre traduit

Implication of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme a reductase in cell transformation: study of enzyme-transfected cell lines

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