Lipoprotéines de haute densité et efflux de cholestérol cellulaire : solement et caractérisation des pré-bêta HDL

par Béatrice Jaspard

Thèse de doctorat en Biochimie analytique struct. et métabolique

Sous la direction de Bertrand Perret.

Soutenue en 1997

à Toulouse 3 en cotutelle avec Toulouse 3 .

mots clés

Résumé

Les lipoproteines de haute densite (hdl) jouent un role majeur dans le transport retour du cholesterol des tissus peripheriques vers le foie. La premiere partie de ce memoire est un rappel bibliographique sur la structure et le metabolisme de ces lipoproteines (chapitre i), et en particulier des pre-beta hdl qui joueraient le role d'accepteurs precoces du cholesterol en exces des membranes cellulaires (chapitre ii). Enfin, le chapitre iii concerne les mecanismes impliques dans l'efflux du cholesterol cellulaire, premiere etape du transport retour. La partie experimentale concerne l'isolement et la caracterisation des pre-beta1 hdl du liquide folliculaire humain qui, en periode preovulatoire, ne contient que des lipoproteines dans le rang des hdl. Le rayon de stokes des pre-b1 hdl a ete estime par electrophorese en double dimension a 3,42 nm. Apres electro-elution sur gel d'agarose, ces particules ont ete isolees par chromatographie d'exclusion. Leur masse moleculaire estimee est de 61,6 kda. Leur analyse lipidique par chromatographie en phase gazeuse a revele un faible rapport cholesterol libre sur apo a-i, exprime en mole par mg d'a-i, compare aux alpha hdl (0,05 0,01 et 0,14 0,04, respectivement), et pour la premiere fois la presence de lipides apolaires (esters de cholesterol et triglycerides). Enfin, elles ont un faible taux de phosphatidylcholines compare aux alpha hdl (40% versus 76% des phospholipides totaux), et contiennent des lysophospholipides et des phospholipides acides. La capacite du liquide folliculaire a promouvoir l'efflux de cholesterol des cellules d'hepatomes de rats (fu5ah) a ete etudie et compare a l'effet de serum homologue. Les parametres d'efflux sont du meme ordre entre le liquide folliculaire et le serum, pour des concentrations equivalentes en cholesterol-hdl. De plus, nous avons montre que les hdl du liquide folliculaire sont capables d'induire un efflux de cholesterol des spermatozoides humains, ainsi qu'une hyperactivation du mouvement flagellaire, des les premieres minutes d'incubation. L'ensemble de ces donnees confirment le role preponderant des hdl comme accepteurs physiologiques du cholesterol cellulaire, pour la premiere fois a partir d'un milieu extravasculaire

Titre traduit

High density lipoproteins and cellular cholesterol efflux. Isolation and characterization of pre-beta hdl

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