Le recepteur humain du vip de type 1 : analyse par mutagenese dirigee et chimerisme moleculaire

The human vip 1 receptor : site-directed mutagenesis ans construction of chimeric receptors

• Auteur / Autrice : PASCALE GAUDIN
• Direction : Marc Laburthe
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Le but de ce travail a ete d'etudier la relation entre la structure et la fonction du recepteur humain du peptide vasoactif intestinal (vip) de type 1, un membre de la famille de classe ii des recepteurs couples aux proteines g. Nous avons entrepris la caracterisation du domaine de liaison du recepteur vip 1 a son agoniste naturel, le vip : 1) parmi les residus des domaines extracellulaires qui sont strictement conserves au sein de cette famille, la mutagenese dirigee a montre que trois acides amines, l'aspartate 68, le tryptophane 73 et la glycine 109, sont cruciaux pour la capacite du recepteur a lier le vip. De plus, la majorite des cysteines conservees de ces domaines sont essentielles dans la fonction de liaison du recepteur. 2) la construction de recepteurs chimeriques a permis de montrer que la selectivite pharmacologique des recepteurs humain et de rat envers un agoniste du recepteur, le phi, est portee par trois acides amines non-adjacents de la premiere boucle extracellulaire et du troisieme domaine transmembranaire. 3) nous avons etudie le role de la n-glycosylation dans la fonction du recepteur. Trois des quatre sites de glycosylation sont effectivement porteurs de motifs sucres ( 69 kda). La glycosylation de deux de ces sites (l'asparagine 58 ou l'asparagine 69) est necessaire et suffisante pour permettre une expression normale du recepteur a la membrane plasmique. 4) nous avons montre que la mutation de l'histidine 178 en arginine, a la fin de la premiere boucle intracellulaire, conduit a une activation constitutive du recepteur vip 1. Cette activation constitutive necessite l'integrite du domaine de liaison extracellulaire. Un autre aspect de notre travail a consiste a etablir et a caracteriser une lignee stable exprimant le recepteur humain vip 1. Cette lignee est un outil important pour etudier la pharmacologie du recepteur vip 1 chez l'homme. Ce travail represente la premiere etude extensive de la relation structure-fonction du recepteur vip 1 humain.