Les map kinase phosphatases (mkp)-1, mkp-2 et mkp-3 : regulation et fonctions dans les fibroblastes

par Jean-Marc Brondello

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de JACQUES POLYSSEGUR.

Soutenue en 1997

à Nice .

mots clés

• Phosphotransférases
• Lignées cellulaires

Résumé

La principale caracteristique de la phosphorylation des proteines cellulaires est sa reversibilite. Dans la cellule, il existe une balance entre la phosphorylation (assuree par des kinases) et la dephosphorylation (assuree par des phosphatases) des proteines. Une modification de cette balance est a l'origine d'une grande partie des mecanismes permettant la transmission des signaux extracellulaires vers le noyau. Les phosphatases sont generalement divisees en trois grandes familles : les serine/threonine phosphatases, les tyrosine phosphatases et les phosphatases a double specificite. Map kinase phosphatase-1 (mkp-1), mkp-2 et mkp-3 sont tous trois membres de la nouvelle famille des phosphatases a double specificite (dsp) qui arborent la sequence consensus : (i/v)hcxagxxr(s/t)g. Ces mkp ont la propriete de dephosphoryler in vitro comme in vivo un substrat archetype, la p42/p44mapk. Afin de determiner l'impact de ces phosphatases sur la regulation des mapk ainsi que leur role dans la proliferation, nous avons entrepris leur etude dans le systeme bien defini des fibroblastes d'hamster chinois, les ccl39. Dans un premier temps, nous avons demontre (i) qu'une forme ectopique de mkp-1 (1-) se localise dans le noyau de cellules quiescentes ou stimulees. (ii) que cette forme surexprimee est capable de bloquer des activites nucleaires de la p42/p44mapk, la transcription de genes de la transition g1/s et enfin la replication de l'adn des cellules transfectees. Dans un second temps, nous avons entrepris la production d'anticorps polyclonaux diriges contre mkp-1 et mkp-2. Nous avons ainsi caracterise les voies de signalisation conduisant a l'expression de mkp-1 et de mkp-2 dans les cellules ccl39. La voie ras/mapk est suffisante pour

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