Propriétés enzymatiques d'analogues de la cytidine. Enantiosélectivités de la désoxycytidine kinase humaine et de la cytidine désaminase humaine

par Manijeh Shafiee

Thèse de doctorat en Chimie organique, minérale, industrielle

Sous la direction de GEORGES MAURY.

Soutenue en 1997

à Montpellier 2 .

mots clés

• Cytidine -- Dérivés
• Nucléosides -- Métabolisme
• Phosphotransférases
• Cinétique enzymatique
• Énantiomères
• Fluorescence
• Antiviraux
• Sida -- Aspect immunologique

Résumé

Les activite de deux enzymes cle du metabolisme des nucleosides de la cytidines ou leurs analogues : la desoxycytidine kinase humaine (dck) et la cytidine desaminase humaine (cda), ont ete determinees vis a vis d'une serie de nouveaux analogues de la d- ou l- cytidine, dans le but de justifier les proprietes antivirales en culture cellulaire de certains de ces composes. Les enantioselectivites de la dck et de la cda ont ete calculees a partir des parametres km et vm obtenus dans des etudes cinetiques. On constate que tous les nucleosides ou analogues de la cytidine de stereochimie sont substrats de la dck quelle que soit l'enantiomerie, au contraire des stereoisomeres l-. Par contre, seuls les enantiomeres l n'etant pas, de surcroit, inhibiteurs de l'enzyme. Une etude preliminaire des sites actifs de la dck humaine par spectrometrie de fluorescence est egalement presentee. La fluorescence intrinseque des tryptophanes de la dck a ete utilisee pour determiner l'affinite des analogues de la d- ou la l-cytidine. Des derives fluorescents n-methylanthraniloyle de la cytidine ont ete synthetises, et utilises pour caracteriser les sites actifs de complexation la dck qui presente deux etats d'affinites differents suivant la concentration du ligand. L'ensemble de notre travail souligne l'interet des l-nucleosides de la serie de la cytidine comme agents antiviraux et montre que la connaissance des enantioselectivites de la dck peut etre tres utile dans la conception de nouveaux analogues dans cette serie.

Titre traduit

Enzymatic properties of cytidine analogs and enantioselectivities of human deoxycytidine kinase and cytidine deaminase

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