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Thèse soutenue

Le transporteur mitochondrial des adénine-nucléotides de la levure Saccharomyces cerevisiae : relations structure-fonction

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Auteur / Autrice : Pierre Roux
Direction : Gérard Brandolin
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie
Date : Soutenance en 1997
Etablissement(s) : Grenoble 1

Résumé

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Le transporteur des adenine-nucleotides est une proteine de la membrane mitochondriale interne qui assure l'import d'adp cytosolique en echange d'atp neosynthetise dans la matrice mitochondriale. Ce systeme est inhibe de maniere tres specifique par le carboxyatractyloside (catr) et l'acide bongkrekique (ba). Les travaux presentes dans ce memoire se rapportent a la dynamique structurale du transporteur mitochondrial des adenine-nucleotides (ancp). Pour cette etude, nous avons mis en uvre le transporteur anc2p de la levure saccharomyces cerevisiae modifie pour porter une extension poly-histidine a son extremite c-terminale. Cette proteine et ses formes mutees par substitution sequentielle des tryptophanes par des tyrosines ont ete purifiees en presence de detergent par chromatographie d'affinite sur une resine portant des ions metalliques immobilises. L'innocuite des mutations et de l'extension poly-histidine a ete controlee au prealable. Nous avons etudie l'accessibilite des trois tryptophanes du transporteur isole en presence de detergent, en appliquant la technique d'extinction de fluorescence. Les resultats obtenus nous ont permis de mettre en evidence la coexistence de deux familles de monomeres du transporteur de structures differentes et de surcroit modifiees par la presence de catr ou de ba. Grace a des modifications chimiques selectives des differents tryptophanes, nous avons pu determiner le degre d'exposition au milieu aqueux de chacun de ces residus au sein des monomeres et en mesurer les variations lors des changements de conformation du transporteur. Enfin, nous avons mis en uvre une approche fluorimetrique par mesure de transfert d'energie d'activation pour evaluer les distances separant les residus de tryptophane du transporteur. A partir de l'ensemble de ces donnees, nous proposons un modele dynamique d'arrangement du transporteur dans la membrane mitochondriale.