Embryogenese somatique entretenue chez hevea brasiliensis mull arg. Aspects cultural et biochimique du developpement et de la maturation des embryons somatiques

par FRANCOISE CAILLOUX

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alain Coudret.

Soutenue en 1997

à Clermont-Ferrand 2 .

mots clés

Résumé

Chez hevea brasiliensis, une forte frequence d'embryogenese secondaire a pu etre induite a partir d'embryons somatiques au stade cotyledonaire. L'utilisation de l'embryogenese repetitive a permis d'etablir une lignee embryogene. Cette lignee est entretenue depuis 3 ans sur un milieu sans hormone. Le repiquage selectif des amas proembryonnaires, tous les 10 jours, s'est avere indispensable pour le maintien des potentialites embryogenes de la souche. La multiplication des amas embryonnaires, sans developpement en embryon, peut etre obtenue par une culture en milieu liquide sans hormone. L'arret du phenomene d'embryogenese secondaire et le developpement d'embryons ont ete possibles grace a une culture en condition de stress osmotique. L'augmentation de la concentration en saccharose (234mm) en presence d'acide abscissique ou l'addition de polyethylene glycol (140 g/l) ont permis d'obtenir un grand nombre d'embryons somatiques au stade torpille. Les etudes biochimiques ont montre que la culture en condition de stress favorisait l'accumulation des substances de reserve. La nature des reserves preferentiellement accumulees est dependante de l'agent osmotique employe. L'augmentation de la concentration en saccharose entraine une forte accumulation en amidon alors que le peg favorise une accumulation en triglycerides, qui reste neanmoins inferieure a celle observee chez l'embryon zygotique mature. De plus, 3 proteines de reserve de 25, 23 et 16 kda sont specifiquement accumulees en condition de stress quel que soit l'agent osmotique utilise. L'utilisation de peg con duit a la synthese specifique de 2 polypeptides de 24,5 et 20,5 kda. Les anticorps antiglobulines 11 s ne reconnaissent aucune proteine chez les embryons somatiques au stade torpille ; en revanche une proteine de type globuline est presente chez l'embryon zygotique en fin de developpement. Part ailleurs, les etudes montrent un effet additif du stress osmotique et de l'addition d'acide abscissique sur l'augmentation de la synthese des proteines lea chez les embryons somatiques au stade torpille. Parmi les proteines lea, un groupe de polypeptides de masse moleculaire proche de 23 kda et de pi compris entre 6,5 et 6,8 et une proteine de 63 kda sont specifiquement reconnus par les anticorps antidehydrine. Des proteines de type dehydrine ont egalement ete mises en evidence chez l'embryon zygotique mature.

Titre traduit

Long term somatic embryogenesis in hevea brasiliensis mull arg. Cultural and biochemical aspect of development and maturation of somatic embryos

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