Les céramides, sphingolipides de l'épiderme : approche d'un dosage immuno-enzymatique

The ceramides, sphingolipids of epidermis approach of a immuno-enzymatic assay

• Auteur / Autrice : Laurent Rocher
• Direction : Jean-Dominique Fourneron
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie organique
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Haptènes

Estérification

Céramides

Sphingolipides

Résumé

Les ceramides sont des lipides complexes appartenant a la famille des sphingolipides. Leur structure est basee sur un diol amine, la sphingosine. Ils occupent une position centrale car ils sont les precurseurs d'autres sphingolipides essentiels tels que les cerebrosides, les gangliosides et la sphingomyeline. Leurs proprietes sont nombreuses et pas toujours bien determinees, cependant ils ont un role biologique essentiel au sein de l'epiderme dans les mecanismes de permeabilite de la peau et de cohesion cellulaire. Un desordre en ceramides entraine des pathologies plus ou moins graves, allant du psoriasis, ichtyose a des sphingolipidoses letales. Recemment, il a ete demontre qu'ils etaient impliques dans d'autres mecanismes biologiques comme recepteurs de toxines, de bacteries et de virus (vih) mais aussi dans le declenchement de l'apoptose (mort cellulaire programmee). Devant l'interet cosmetique, biologique et medical des ceramides, leur dosage parait important et necessaire. Les methodes utilisees sont empruntees a la chimie analytique classique (clhp, cg, cg/sm) mais elles restent des methodes cheres, lourdes et parfois peu sensibles. De plus l'extraction in vivo de ces molecules posent le probleme de l'utilisation de solvants toxiques (chloroforme, methanol,. . . ). Notre objectif est de trouver un moyen de doser ces molecules de facon rapide, peu couteuse et surtout sensible. Nous avons entrepris le developpement d'un test immuno-enzymatique comme il en existe pour des molecules de petite taille (haptenes). Ce type de dosage se revele etre tres sensible. La mise en uvre passe tout d'abord par des transformations chimiques du ceramide pour le rendre immunogene en vue du programme d'immunisation. Les etapes suivantes sont essentiellement biologiques et decrivent l'obtention d'un anticorps monoclonal anti-ceramide, outil biologique indispensable pour un dosage immuno-enzymatique. Les opportunites de l'utilisation de cet anticorps monoclonal ne se resument pas seulement a un dosage elisa. En effet, des methodes de visualiser des ceramides sont possibles en immuno-histochimie ou en immuno-ccm.