Dynamique du cytosquelette microtubulaire : purification et caractérisation des complexes protéiques contenant la tubuline gamma dans les cellules somatiques. Implications pharmacologiques

par Claire Detraves

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Michel Wright.

Soutenue en 1996

à Toulouse 3 .

mots clés

• Composés complexes
• Microtubules
• Tubulines
• Protéines du cytosquelette

Résumé

Le cytosquelette microtubulaire des eucaryotes est essentiel pour de nombreuses fonctions cellulaires (mitose, transport intracellulaire). Les microtubules, formes par l'assemblage polarise d'heterodimeres de tubuline /, sont assembles in vivo sur des centres organisateurs des microtubules. La regulation de la nucleation des microtubules joue un role central au cours du cycle cellulaire et de la morphogenese, mais est encore incomprise. La tubuline est l'une des rares proteines connues necessaires a la nucleation des microtubules. Elle represente 0. 01% des proteines cellulaires et se trouve associee aux structures insolubles du cytosquelette, mais est egalement presente au sein de complexes proteiques solubles dans les tampons physiologiques. Nous avons montre que ces complexes sont de taille heterogene pouvant atteindre de tres hautes masses moleculaires. Nous avons purifie la tubuline par immunoaffinite a partir de cerveaux de mammifere et mis en evidence son association avec les tubulines et et cinq autres proteines (75 kda, 105 kda, 130 kda, 195 kda et 250 kda) dans des complexes de composition heterogene. Nous avons egalement caracterise dans la fraction immunopurifiee quatre isoformes de tubuline dont deux isoformes majoritaires. Les complexes purifies contenant la tubuline , bien qu'heterogenes par leur composition proteique et leur masse apparente, sont tous capables de se lier in vitro a l'extremite des microtubules. Cette propriete peut fournir un essai pharmacologique pour la recherche de substances interagissant avec la tubuline en modifiant sa fixation aux microtubules. La caracterisation des proteines associees a la tubuline au sein de ces complexes proteiques devrait permettre d'analyser leur role au cours de la nucleation des microtubules et de comprendre la regulation de la dynamique du cytosquelette microtubulaire

Titre traduit

Dynamic of the microtubule cytoskeleton purification and characterization of protein complexes containing gamma-tubulin in somatic cells pharmacological implications

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