Thèse soutenue

Etude des fonctions d'une proteine apparentee a l'actine, act2p/arp2p chez saccharomyces cerevisiae
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Auteur / Autrice : Violaine Moreau
Direction : Barbara Winsor
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Date : Soutenance en 1996
Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

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Mon travail de these a porte sur une proteine apparentee a l'actine (arp pour actin-related protein), act2p/arp2p chez saccharomyces cerevisiae. Le gene arp2 a ete isole et sequence au laboratoire (schwob et martin, 1992, nature 355:179-182). A travers des approches genetiques, immunologiques et cellulaires, nous avons etudie les fonctions essentielles et la localisation cellulaire de la proteine arp2p. Dans un premier temps, nous avons construit des outils necessaires a l'investigation des fonctions de arp2p: nous avons elabore un systeme genetique permettant la selection de mutants thermosensibles et nous avons obtenu des anticorps specifiques de la proteine arp2. Puis, l'etude des phenotypes d'un mutant parmi les 8 sequences (allele arp2-h330l) et la localisation intracellulaire de la proteine, nous ont permis de conclure a une implication de la proteine arp2 au sein meme du cytosquelette d'actine. En effet, arp2p colocalise partiellement avec l'actine dans les filaments des taches corticales. De plus, le mutant etudie presente non seulement une alteration de la polarite de l'actine, mais aussi une alteration du site de bourgeonnement et une osmosensibilite. Lors de l'analyse du trafic intracellulaire, un defaut dans l'etape d'internalisation de l'endocytose a egalement ete mis en evidence dans le mutant arp2-h330l, dans des conditions ou le cytosquelette n'est pas visiblement perturbe. En effet, une protection contre la degradation de la permease a uracile, fur4p a ete montre des 25c. Par contre, une alteration de la secretion des hydrolases vacuolaires n'a pas pu etre mise en evidence. Seule une legere accumulation de vesicules dans les bourgeons des cellules a ete observe a temperature restrictive. L'ensemble de ces resultats permettent de conclure a un role essentiel de la proteine arp2p au niveau du cytosquelette d'actine corticale et dans l'etape d'internalisation de l'endocytose chez la levure saccharomyces cerevisiae