Transport des anthracyclines dans les cellules k 562 sensibles et resistantes a la doxorubicine. Etude de la fonctionnalite de la p-glycoproteine dans les cellules k562 vivantes avant et apres photomarquage par un analogue photoactivable du verapamil

par Samlee Mankhetkorn

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Arlette Garnier-Suillerot.

Soutenue en 1996

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

La resistance multiple aux antitumoraux (mdr), liee a la surexpression du gene mdr qui code pour la p-glycoproteine est la cause directe des difficultes pour soigner plus efficacement les cancers qu'on ne sait le faire. Elle se caracterise par un taux d'antitumoraux insuffisant dans les cellules pour inhiber la proliferation cellulaire. Les quatre anthracyclines ayant le meme sucre amine sont utilisees pour analyser leurs parametres de transport dans les cellules k562 sensibles et resistantes. Les vitesses d'entree de ces medicaments sont extremement differentes (d'un facteur 400), alors que leurs vitesses d'efflux actif sous l'effet de la p-glycoproteine sont comparables (un facteur 3) ainsi que leur affinite pour la p-glycoproteine (un facteur 2). Il semble que le facteur k#+ joue un role tres important sur la concentration de drogue intracellulaire. Cet efflux actif, sous l'action de la p-glycoproteine, n'est inhibe que partiellement par le verapamil et la vinblastine et cela independamment de la nature de l'anthracycline. La concentration de verapamil ou de vinblastine entrainant une inhibition de ce flux actif a 50% est respectivement egale a 0,55 m et 40 m. La photofixation dans les cellules vivantes, de edp 82, derive photoactivable du verapamil, empeche le rejet des anthracyclines par la p-glycoproteine. Cette photofixation est inhibee a 100% par le verapamil (50% de l'effet est obtenu a concentration egale a 2 0,5 m) et a environ 50% par les anthracyclines. Nous avons teste 5 anthracyclines ayant des pka differents et nous sommes arrives a la conclusion que seule la forme neutre de ces anthracyclines etait capable d'inhiber la photofixation de edp 82 (50% de cet effet est obtenu a 0,18 0,06 m en anthracycline neutre). Par contre, le triton x-100, la cyclosporine a et le bromure de didoecyldimethylammonium n'ont pas inhibe la photofixation. Nous avons suivi l'incorporation d'un derive fluorescent du verapamil, l'edp 96, dans les cellules sensibles et resistantes. Cette incorporation est sensiblement la meme dans les deux types cellulaires. L'intensite fluorescente de ce compose etant tres sensible au ph, nous avons observe la presence de compartiments beaucoup plus acides dans les cellules resistantes que dans les cellules sensibles

Titre traduit

Transport mechanism of anthracyclin derivatives in sensitive and resistant k562 cells: study of the functionality of p-glycoproteinmediated efflux in living cells before and after photolabeling with an verapamil analog

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