L'activation des lymphocytes t : de la membrane au noyau, un reseau complexe d'interactions fonctionnelles entre les tyrosine kinases et les tyrosine phosphatases. un nouveau mecanisme de regulation du facteur de transcription nf-kb

par VERONIQUE IMBERT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de B. ROSSI.

Soutenue en 1996

à Nice .

mots clés

Résumé

Dans les cellules eucaryotes, la phosphorylation des proteines sur tyrosine est l'un des principaux mecanismes de la transmission des signaux regulant l'activation, la proliferation et la differenciation cellulaires. Le niveau de phosphorylation sur tyrosine est le resultat d'un equilibre entre les activites des proteines tyrosine kinases (ptk) et des proteines tyrosine phosphatases (ptp). Nous avons etudie l'importance de ces reactions dans la regulation du signal d'activation des lymphocytes t. Nous avons montre que le peroxyde de vanadate (pervanadate), un puissant inhibiteur de ptp, induit l'activation des cellules de la lignee leucemique t humaine jurkat. Le pervanadate provoque une augmentation de la phosphorylation sur tyrosine des proteines cellulaires due a l'activation sequentielle des tyrosine kinases lck/fyn et zap-70. Ces evenements de phosphorylation ont pour consequences une augmentation de la concentration intracellulaire en calcium correspondant a un influx, l'activation de facteurs de transcription (nf-kb et ap-1), l'apparition de marqueurs de surface (cd69 et cd25) et la production d'interleukine 2. Ces resultats montrent que les ptp exercent globalement un controle negatif sur l'activation des lymphocytes t. Grace a des mutants de la lignee jurkat deficients pour cd45, la ptp majoritaire des lymphocytes t, nous avons observe que cd45 pouvait reguler negativement l'activite enzymatique de lck et fyn, mettant ainsi en evidence un double role regulateur de cd45 sur ces kinases. L'ensemble de ces travaux montre qu'il existe un reseau complexe d'interactions fonctionnelles et sequentielles entre ptk et ptp, regulant la transduction du signal d'activation des lymphocytes t. De plus, les ptk associees au recepteur t exercent des fonctions distinctes, zap-70 etant plus particulierement impliquee dans le controle des flux calciques. L'activation du facteur de transcription nf-kb par le pervanadate suggere un role de la phosphorylation sur tyrosine dans la regulation de ce facteur, crucial pour le controle de l'expression de nombreux genes au cours des reponses immune et inflammatoire. A l'etat inactif, nf-kb est sequestre dans le cytoplasme par un inhibiteur ikb-. Le modele classique d'activation de nf-kb passe par la phosphorylation sur serine d'ikb- et la degradation de cet inhibiteur par le proteasome. Nous avons demontre l'existence d'un nouveau mecanisme d'activation de nf-kb qui utilise la phosphorylation sur tyorisine d'ikb- afin d'induire la dissociation des complexes ikb/nf-kb. Un des effecteurs physiologiques de cette reaction est la reoxygenation des tissus apres hypoxie, impliquant la participation des radicaux libres oxygenes. Les reactions de phosphorylation sur tyrosine sont donc impliquees a plusieurs niveaux dans les voies de transduction des signaux d'activation des lymphocytes t

Titre traduit

T cell activation: from cell surface to nucleus, a complex network of functional interactions between tyrosine kinases and tyrosine phosphatases: a new mechanism of regulation of nf kappa b transcription factor

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