Mise au point d'une méthode d'analyse quantitative du cholestérol et de ses esters dans les lésions d'athérosclérose humaine par spectrométrie de diffusion Raman dans le proche infrarouge

par Pierre Weinmann

Thèse de doctorat en Spectrochimie

Sous la direction de Quy Dao Nguyen.

Soutenue en 1996

à Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris .

mots clés

• Athérosclérose
• Cholestérol
• Spectroscopie
• Lipides

Résumé

Au cours de l'athérosclérose, le contenu en lipides de la paroi artérielle augmente très fortement. La composition de ces lipides est connue et elle a été établie par l'utilisation de la méthode de Folch, seule technique permettant d'extraire les lipides au sein d'un milieu biologique. Il s'avère ainsi que l'essentiel des lipides rencontrés dans les lésions d'athérosclérose est composé de cholestérol et d'esters de cholesteryle. La méthode de Folch, fiable mais laborieuse, nécessite de broyer les échantillons biologiques au préalable. Pour avancer dans la compréhension de l'athérosclérose, le besoin d'une technique rapide, fiable et non destructrice est donc bien réel. C'est dans cette optique que nous avons développé une méthode d'analyse quantitative du cholestérol et de ses esters dans les lésions d'athérosclérose humaine fondée sur la spectrométrie de diffusion Raman dans le proche infrarouge. Cette technique permet en effet l'analyse discriminative de différents composants dans un milieu complexe et a déjà fait l'objet de plusieurs travaux dans le domaine biomédical. Ainsi des travaux préliminaires avaient montré que la spectrométrie Raman est capable de reconnaitre le cholestérol et ses esters dans les lésions d'athérosclérose humaine et qu'une analyse quantitative est possible dans des milieux synthétiques et dans des modèles d'athérosclérose animale simplifiée, en utilisant une méthode mathématique d'analyse factorielle, la méthode PLS (partial least squares). Nous avons dans un premier temps constitué une banque de spectres Raman sur 31 broyats d'aorte atherosclereuses deshydratees. Puis, nous avons effectué les analyses biochimiques de référence du cholestérol et de ses quatre principaux esters (linoleate, oleate, palmitate, stéarate). Ceci nous a permis d'améliorer très sensiblement la technique de Folch en utilisant un anti-oxydant, de tester sa reproductibilité (coefficient de variation égal à 5%) et de mettre au point une technique de quantification enzymatique du cholestérol et de ses esters dans les broyats d'aortes déshydratées. La spectrométrie de diffusion Raman, couplée à la méthode PLS, s'est révélée être une méthode de quantification rapide et reproductible, souffrant cependant d'une imprécision encore un peu trop importante, semblant être due au nombre restreint d'échantillons utilises. En effet, le protocole expérimentale d'extraction biochimique s'est révélé long, car nous avons pratiqué la technique de Folch en triple exemplaires pour chaque échantillon, afin de tester sa reproductibilité. Les développements de la méthode devraient permettre d'améliorer la fiabilité de cette technique déjà rapide, non destructrice et reproductible. La possibilité de quantifier le cholestérol et ses esters dans les lésions d'athérosclérose offrira ainsi un outil précieux à la recherche sur l'athérosclérose.

Titre traduit

Quantitative analysis of cholesterol and cholesterol esters in human atherosclerotic lesions using near infrared Raman spectroscopy

Pas de résumé disponible.