Mise au point d'une electrode a pate de carbone impregnee de nafion. Application a l'immunodosage de medicaments et au dosage indirect d'une enzyme

par STEPHANE RAPICAULT

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Chantal Degrand.

Soutenue en 1996

à Clermont-Ferrand 2 .

mots clés

Résumé

Ce travail decrit la mise au point d'une electrode a pate de carbone impregnee de nafion, de surface renouvelable et utilisable immediatement sans conditionnement. Afin d'optimiser la composition et la fabrication de la pate modifiee, nous avons etudie l'accumulation et la detection d'une molecule cationique modele par voltammetrie a vague carree. Nous avons constate qu'un simple melange de poudre de graphite, d'huile de silicone et de nafion ne donnait pas les meilleures performances tant au niveau du courant residuel, en raison de la presence d'un pic parasite, qu'au niveau de la sensibilite. Ceci nous a conduit a mettre au point une electrode offrant un courant residuel satisfaisant et une bonne sensibilite. Les performances de cette electrode sont liees au fait qu'elle est constituee non seulement de poudre de graphite et d'huile de silicone, mais egalement de 1-octanol, et que le nafion est neutralise prealablement a son utilisation. Une fois cette optimisation faite, nous avons montre que cette electrode conduisait a une detection sensible et selective de la phenytoine marquee au cobalticinium, ce qui nous a permis de realiser le dosage de la phenytoine, un haptene modele, selon un immunodosage competitif en phase homogene. La methode a ete appliquee avec succes au dosage de cet anti-epileptique dans un echantillon clinique. Enfin, l'electrode a pate de carbone impregnee de nafion a ete utilisee comme capteur pour le dosage indirect de la phosphatase alcaline. La detection de cette enzyme est obtenue par dosage du produit (alcool) forme par hydrolyse d'un substrat (monoester orthophosphorique). Les courbes de calibration de l'enzyme ont ete tracees pour deux substrats enzymatiques marques par un groupement ferrocenyle. Afin d'ameliorer la sensibilite de detection, l'etude partielle d'un substrat marque par un groupement cobalticinium a donne des resultats encourageants pour le dosage futur de l'enzyme

Titre traduit

Development of a nafion-loaded carbon paste electrode. Application to drugs immunoassays and to indirect determination of an enzyme

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