Développement d'un tensiomètre à goutte pour l'étude des enzymes lipolytiques

Oil drop tensiometer development to study lipolytic enzymes

• Auteur / Autrice : Sandrine Labourdenne
• Direction : Robert Verger
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Ingénia
• Date : Soutenance en 1996
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (1969-2011)

Résumé

Un tensiometre a goutte a ete utilise pour etudier l'action des enzymes lipolytiques sur des triglycerides a longues chaines, a l'interface huile/eau. La reaction enzymatique est suivie soit par l'enregistrement au cours du temps des variations de la tension interfaciale, due a l'accumulation des produits d'hydrolyse a l'interface, soit en maintenant la tension interfaciale a une valeur de consigne, en augmentant la surface de la goutte. Nous avons montre que la diminution initiale de la tension interfaciale etait rigoureusement proportionnelle a la concentration en lipase dans la cuve de mesure. Nous avons etudie le comportement de surface des produits de la lipolyse, par la technique des films monomoleculaires, en absence de toute enzyme. Nous avons ensuite etudie l'action de deux lipases digestives (pancreatique et gastrique) et plus particulierement, l'effet de la colipase et des sels biliaires sur l'hydrolyse d'une goutte d'huile par la lipase pancreatique humaine (lph). La biotinylation de la lph (lph*) a permis, par test elisa, de determiner la quantite de lph* adsorbee a la surface de la goutte, responsable des variations de tension interfaciale. Nous avons montre que, pour des concentrations en sels biliaires inferieures a la concentration micellaire critique, ces detergents n'avaient aucun effet ni sur l'adsorption ni sur la vitesse d'hydrolyse de la lph. De plus, nous avons pu observer que la colipase n'augmentait pas l'adsorption de la lph*, mais augmentait considerablement l'activite moleculaire de la lph a l'interface huile/eau. Par consequent, la colipase se comporte comme un veritable co-facteur de la lipase