Contributions a l'etude des relations structure/fonction de la cytochrome oxydase de levure par cartographie fonctionnelle

par PHILIPPE LEMARRE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Netter.

Soutenue en 1995

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

La cytochrome oxydase correspond au complexe 4 de la chaine respiratoire. Elle catalyse la reduction de l'oxygene moleculaire couplee a une translocation vectorielle de protons. C'est une proteine de la membrane mitochondriale interne ; elle est composee d'au moins 11 sous-unites chez la levure, dont 3 sont codees par le genome mitochondrial. Ces trois sous-unites sont homologues aux sous-unites de certaines cytochrome oxydases et ubiquinol oxydases bacteriennes et peuvent etre considerees comme les sous-unites catalytiques de l'enzyme. La structure tridimensionnelle de cette proteine est inconnue et ce travail presente une contribution a l'etude des relations structure/fonction de cette proteine par cartographie fonctionnelle, methode alternative a la cristallographie aux rayons x, et basee sur l'etude des mutants ponctuels de la sous-unite 1 (d'origine genetique mitochondriale) et des revertants selectionnes in vivo a partir de ces mutants. On caracterise donc ainsi des couples mutants/revertants pouvant donner des informations sur le fonctionnement de l'enzyme mais aussi sur des interactions entre deux regions de la proteine, distantes l'une de l'autre sur la sequence primaire. Dans ce travail, nous avons caracterise par la sequence nucleotidique plus d'une vingtaine de mutants issus d'une selection realisee dans une souche dont le genome mitochondrial ne porte pas d'intron. Nous avons selectionne des revertants a partir d'une dizaine de mutants et nous avons ainsi pu caracterise une quinzaine de revertants differents. Les significations fonctionnelles des reversions sont discutees. Un modele de repliement pour l'enzyme est propose

Titre traduit

Contributions to the study of the structure/function relationships of the yeast cytochrome oxidase by function-based mapping

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