Étude de la cyclophiline B : purification et caractérisation de la cyclophiline B du lait de femme : détermination du site d'interaction de la cyclophiline B avec son récepteur lymphocytaire

par Christophe Mariller

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Geneviève Spik.

Soutenue en 1995

à Lille 1 .

mots clés

• Enzymes
• Lait maternel
• Récepteurs
• Isomérisation

Résumé

Les cyclophilines appartiennent à la famille des peptidyl prolyl cis-trans isomérases. Cette famille est constituée de plusieurs isoformes qui présentent de fortes homologies structurales et fonctionnelles mais possèdent des localisations cellulaires différentes. Au cours de nos travaux, nous avons isolé par chromatographie d'échange de cations une cyclophiline à partir du lait de femme à une concentration de 100 g/ml. Cette cyclophiline sécrétée a été identifiée comme étant la cyclophiline B (CypB). Elle se distingue de la cyclophiline à cytosolique, par des extrémités N- et C-terminales spécifiques et par la présence d'une séquence signal. L'utilisation conjointe de la spectrométrie de masse et de techniques d'analyses des protéines comme la dégradation récurrente par des enzymes protéolytiques a montré que la forme sécrétée de la CyPB dans le lait de femme est dépourvue de son extrémité C-terminale AIAKE. Nos résultats coïncident avec ceux de la littérature décrivant la séquence C-terminale de la CypB comme responsable de sa rétention dans le réticulum endoplasmique et suggèrent une importante prépondérante de la séquence AIAKE. L'identification d'un récepteur de la CypB à la surface des cellules Jurkat nous a amené à rechercher les régions de la CypB impliquées dans l'interaction avec ce récepteur. Des expériences de compétition avec des peptides de synthèse et des cyclophilines B modifiées chimiquement ou par mutagenèse dirigée montrent que l'extremité N-terminale de la CyPB est impliquée dans l'interaction avec le récepteur. Nos travaux ont conduit à l'isolement d'une nouvelle cyclophiline et ont mis en évidence l'importance des extrémités N- et C-terminales spécifiques de cette cyclophiline dans des phénomènes de reconnaissance.

Titre traduit

Study of cyclophilin B : purification and characterization of cyclophilin B from human milk : determination of the cyclophilin B binding site with the Jurkat T cells receptor

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