Recherche Avancée

Thèse soutenue

La sous-unité flavoprotéique de la sulfite réductase : contribution à l'étude des activités flavine réductases chez Escherichia coli

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Auteur / Autrice : Michel Eschenbrenner
Direction : Marc Fontecave
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

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Chez escherichia coli, la sulfite reductase (sir, 780 kda) est purifiee a partir de son activite flavine reductase. Cette nouvelle activite enzymatique attribuee a sir est particulierement interessante dans le sens ou elle lui permet de participer au systeme d'activation de la ribonucleotide reductase et de catalyser la reduction de differents ferrisiderophores tout comme fre, qui etait la seule flavine reductase identifiee chez e. Coli. Ainsi, cette hemoflavoproteine possede la capacite d'intervenir dans la synthese de l'adn et dans le metabolisme du fer. Les sous-unites alpha de sir sont identifiees comme responsable de l'activite flavine reductase de cette enzyme. La construction du surproducteur de la partie flavoproteique de sir (sir-fp) est alors realisee et permet la mise au point d'un protocole rapide et efficace de purification de sir-fp. La caracterisation complete de son activite flavine reductase met en evidence un mecanisme ping-pong et revele le role essentiel du fad endogene en tant que reducteur des flavines libres. De plus, un nouveau modele structural de cette proteine est propose avec un fad et un fmn endogenes par sous-unite alpha. La recherche d'autres activites flavine reductases chez e. Coli permet l'identification et la caracterisation de deux enzymes supplementaires: la ferredoxine: nadp oxydoreductase (fnr, 28 kda) et la proteine hemoglobine-like (hmp, 44 kda). La faible activite de cette derniere permet de negliger son role physiologique en tant que flavine reductase. Ainsi, e. Coli possede principalement trois flavine reductases solubles, avec par ordre decroissant d'importance: la nad(p)h:flavine oxydoreductase, la sulfite reductase et la ferredoxine:nadp oxydoreductase