Analyse de la structure tridimentionnelle des protéines par résonance magnétique nucléaire : application à l'étude de la jonction COL1-NC1 des collagènes FACIT et au domaine de fixation à l'ADN du facteur de transcription FRUR

par Anne Lesage

Thèse de doctorat en Biophysique moléculaire

Sous la direction de Michel Van Der Rest.

Soutenue en 1995

à Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris .

mots clés

• Ponts disulfures
• Résonance magnétique nucléaire
• Collagène
• Structures spatiales

Résumé

Nous avons utilisé la résonance magnétique nucléaire d'une part pour l'étude structurale de peptides synthétiques mimant la jonction COL1-NC1 des collagènes FACIT, et d'autre part pour la détermination de la structure 3D du domaine d'interaction à l'ADN du régulateur transcriptionnel FRUR, domaine appelé FRUR (1-57). Les peptides ont été synthétisés et associés en trimères reliés par trois ponts disulfures inter-chaines. Les trimères formes ont été caractérisés par microsequençage, dichroîsme circulaire et RMN. Un modèle structural est proposé pour la jonction COL1-NC1 des collagènes FACIT. Des expériences RNM hétéronucleaires azote 15-proton à deux et trois dimensions ont été réalisées sur le domaine FRUR (1-57). Elles ont permis l'identification des effets nOe et la mesure des constantes de couplage HN-h : experiences 2D gHSQC, 3d NOESY-HMQC, 3D TOCSY-HMQC, 3D HNHA.

Titre traduit

Protein three-dimensional structure analysis by nuclear magnetic resonance : application to the COL1-NC1 junction of facit collagens and to the DNA-binding domain of FRUR protein

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