Recherche Avancée

Thèse soutenue

Production de fragments d'anticorps actifs par génie génétique chez la bactérie E. Coli

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Auteur / Autrice : Renaud Du Pasquier
Direction : Alberto Roseto
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie
Date : Soutenance en 1995
Etablissement(s) : Compiègne
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale 71, Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Résumé

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En cherchant à produire un anticorps sous forme de Fv nous avons voulu obtenir une molécule de petite taille, constituée des seuls domaines variables de l'anticorps. Nous avons exprimés des protéines de fusion dans lesquelles le Fv est associé à une enzyme ou à une protéine ayant un rôle de marqueur. Le mode d'expression choisi est l'exportation de la protéine recombinante native vers le périplasme de la bactérie Escherichia coli. L'anticorps utilisé est une immunoglobuline de classe mu, 83D4, dirigée contre un marqueur de tumeur du sein. Son épitope est constitué de déterminant Tn. L'antigène Tn est un marqueur important des tumeurs humaines. Les stratégies suivies pour la construction génétique de fragments d'anticorps, surtout sous la forme Fv, sont analysées dans la littérature, ainsi que les différentes options adoptées pour la production de ces fragments par des organismes eucaryotes ou procaryotes. Pratiquement, nous avons construit un vecteur plasmidique qui permet la production de Fv à chaîne unique (sFv). Dans un premier temps, la production du Fv83D4 et du sFv83D4 associés à la phosphatase alcaline de E. Coli est évaluée. Le rendement de production par la bactérie est jugé trop faible et on observe que le Fv est en partie dissocié. Dans un second temps, le sFv83d4 est associé à la protéine fixant le maltose de E. Coli (MalE). Parallèlement le sFv83D4 est exprimé à la surface du phage M13. Cette construction ne parait pas fonctionnelle. La protéine de fusion MalE-sfv83D4 est produite en quantité jugée suffisante. La fonctionnalité biologique de la protéine de fusion est estimée de manière directe sur les antigènes (ELISA) ou indirectement par pseudo-compétition avec l'IgM 83D4. Enfin, le sFv83D4 peut être obtenu isolé par action du facteur Xa sur la protéine de fusion avec MalE.