Les phospholipases D d'origine végétale : purification, caractérisation biochimique, immunologique et structurale

Plant phospholipase D: purification, biochemical, immunological and structural characterization

• Auteur / Autrice : Abdelkarim Abousalham
• Direction : Robert Verger
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Enzymologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Ecole(s) doctorale(s) : Ecole Doctorale Sciences de la Vie et de la Santé (Marseille)
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (1969-2011)

Résumé

La phospholipase d (pl d) 3. 1. 4. 4 a ete purifiee a l'homogeneite a partir de chou, de tournesol et de soja. C'est une glycoproteine de masse moleculaire 90-92 kda ; l'activite est dependante du calcium. Des anticorps ont ete produits contre un peptide synthetique correspondant a l'extremite n-terminale de la pl d de chou. Ils ont une reactivite croisee avec les autres pl d. Les sequences n-terminales des pl d presentent une grande homologie. La specificite de substrat depend de la longueur de chaine, du degre d'insaturation des acides gras et de la tete polaire. En utilisant la technique des films monomoleculaires, une nouvelle methode de mesure de l'activite pl d a ete developpee. L'action de la pl d libere l'acide phosphatidique qui reste a l'interface et qui sera hydrolyse par la lipase pancreatique de porc, prealablement injectee dans la phase aqueuse. L'activite mesuree est proportionnelle a la quantite de pl d. Nous avons examine la distribution tissulaire et subcellulaire de la pl d et son activation durant la germination de la graine de tournesol. L'activite, absente dans la graine seche, augmente a partir du 4e jour pour atteindre un maximum vers le 7e jour. Les anticorps reagissent avec une seule bande, qui apparait a partir du 4e jour. Ces resultats ont ete completes par la determination du niveau des arnm de la pl d au cours de la germination. L'evolution du taux de l'arnm de la pl d est correlee a celle de la biosynthese de l'enzyme qui apparait des le 4e jour. L'activite pl d dans les jours 5 a 7 est due a la synthese de novo de l'enzyme a partir des arnm detectes au 4e jour