Mise au point de techniques chromatographiques de purification de la spiraline et contribution a l'etude topo-fonctionnelle de la proteine

par CATHERINE BRENNER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de Henri Wróblewski.

Soutenue en 1994

à Rennes 1 .

mots clés

Résumé

Cette these est consacree a l'etude de la spiraline, proteine majoritaire de la membrane des spiroplasmes. Notre objectif etait d'approfondir l'analyse de sa topologie et de developper une methode rapide de purification en conditions non denaturantes. L'etude topo-fonctionnelle a ete realisee sur la proteine complete et sur une copie de synthese d'un segment susceptible de former une helice , en utilisant des techniques de prediction de structure secondaire, le dichroisme circulaire, la microscopie electronique (coupes ultrafines et cryofractures), la technique des bicouches lipidiques planes et des marquages a l'aide d'anticorps. Les resultats que nous avons obtenus indiquent que la spiraline est une proteine monotopique ancree a la surface des spiroplasmes pour y former une couche parietale de protection d'un type nouveau. Le segment de 20 residus localise dans le dernier tiers de la sequence de la spiraline contient un epitope de type b et constitue tres vraisemblablement une helice de surface d'un domaine globulaire de la proteine. Par une etude comparative de la dissolution de la membrane de spiroplasma melliferum par dix-sept tensioactifs (nouveaux ou commerciaux), nous avons determine des conditions optimales d'extraction de la spiraline (selectivite, rendement et preservation de l'antigenicite et developpe des methodes de purification par chromatographie en hplc et fpic en systeme micellaire. Ces methodes sont rapides, non denaturantes et permettent de preparer des quantites de proteine pure compatibles avec les besoins de l'etude structuro-fonctionnelle de la proteine

Titre traduit

Development of chromatographic methods and topofunctional study of the protein

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