Etude biophysique et biochimique de promoteurs hybrides d'escherichia coli contenant des sequences d'adn courbes inserees en amont

par FLORENT ZUBER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Henri Buc.

Soutenue en 1994

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

Les suites d'adenines sont des sequences d'adn possedant une courbure intrinseque de la double helice, et des cinetiques d'ouverture transitoires des paires de bases, mesurees par spectroscopie rmn, qui sont anormales. Nous montrons ici que les cinetiques d'ouverture restent anormales dans un solvant organique comme le dimethylsulfoxide (dmso), tandis que la courbure globale disparait. Nous proposons qu'une dislocation entre les suites d'adenines apparait en presence de dmso. Lorsque certaines sequences d'adn courbes sont inserees en amont d'un segment tronque du promoteur gal, une activation de la transcription est obtenue in vivo chez escherichia coli. Nous montrons qu'un promoteur qui reste inactif, qui contient la sequence 5a6a courbe, devient un promoteur fort lorsqu'il est dans une souche depourvue d'une proteine du nucleoide, h-ns. L'etude de la transcription in vitro, completee par des empreintes a la dnase-i, demontre que la repression est due a une repression directe par h-ns. Enfin la sequence 5a6a, en presence de la proteine h-ns, reprime egalement l'expression d'un promoteur, bla, distant de 180 pb. Ces resultats ouvrent la perspective d'etudier l'interaction du nucleoide bacterien avec l'expression genetique, puisque nous avons montre que des promoteurs peuvent y etre particulierement sensibles

Titre traduit

Biophysical and biochemical study of hybrid promoters of escherichia coli with bent dna sequences inserted upstream

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