Construction de systemes de mutagenese par transposition pour les mycobacteries

Construction of transposition mutagenesis systems for mycobacteria

• Auteur / Autrice : Christophe Guilhot
• Direction : Brigitte Gicquel
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

La tuberculose, maladie causee par mycobacterium tuberculosis, demeure un probleme majeur de sante publique. Pour etudier les determinants genetiques de la virulence de ce bacille, nous avons decide de construire un systeme de mutagenese par transposition. Deux nouvelles sequences d'insertion, is6120 et is1137 ont ete isolees chez la souche modele m. Smegmatis. Is6120 appartient a une nouvelle famille d'elements transposables jusqu'alors non identifiee. Is1137 presente toutes les caracteristiques des sequences d'insertion de la famille de is3. Pour transferer ces transposons et permettre la selection des insertions chromosomiques, nous avons isole deux plasmides thermosensibles apres une mutagenese chimiques d'un vecteur navette e. Coli/mycobacteries. Nous avons utilise l'un d'eux pour transferer tn611, un derive du transposon tn610 isole precedemment. Cet element mobile est compose de deux copies de is6100 capables, chacune d'elle, de transposer suivant un mecanisme de type replicatif. Nous avons construit plusieurs banques de mutants d'insertion de notre souche modele, m. Smegmatis mc#2 155. Nous avons isole dans ces banques 79 mutants auxotrophes et 10 mutants affectes dans le metabolisme de l'arginine et d'autres composes guanidiliques. Nous avons demontre la transposition de tn611 dans m. Bovis bcg, une mycobacterie du complexe de m. Tuberculosis. Dans cette souche, tn611 a des caracteristiques de transposition semblables a celles observees dans m. Smegmatis et constitue donc un excellent outil pour un systeme de mutagenese