Analyse de la stabilite et du desordre structural de la tyrosyl-trna synthetase de bacillus stearothermophilus, au moyen de proteines hybrides

par VALERIE GUEZ-IVANIER GUEZ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Hugues Bédouelle.

Soutenue en 1994

à Paris 7 .

mots clés

Résumé

J'ai etudie certains aspects du repliement et de la stabilite de la tyrosyl-trna synthetase (tyrrs) par des methodes d'ingenierie des proteines. 1) l'etude de la stabilite a consiste a cartographier les interactions qui rendent la tyrrs de bacillus stearothermophilus (bst-tyrrs) plus stable que son homologue d'escherichia coli (eco-tyrrs). Nous avons construit 9 proteines hybrides, dont la partie n-terminale venait d'eco-tyrrs et la partie c-terminale de bst-tyrrs. Les proprietes de ces hybrides ont montre les points suivants: a) les sequences et structures des deux enzymes peuvent se remplacer localement pour donner une tyrrs stable et active. B) la stabilite plus grande de bst-tyrrs est due aux effets cumules de mutations reparties le long de la sequence. C) des mutations compensatoires ont eu lieu entre les deux tyrrss durant l'evolution. 2) l'etude du repliement de la tyrrs a concerne son domaine c-terminal (residus 320-419), qui est desordonne dans le cristal. En comparant la denaturation de tyrrss tronquees ou hybrides, j'ai montre que le domaine c-terminal est replie en solution, mais qu'il a un comportement anormal sous sa forme isolee. 3) nous avons trouve que la surproduction de tyrrs est toxique pour e. Coli. Une analyse genetique a montre que cette toxicite provient d'interactions erronees entre la tyrrs et des trnas ; elle a suggere que la fidelite de la traduction depend d'un equilibre correct entre concentrations cellulaires de synthetases et de trnas

Titre traduit

Analysis of the stability and disorder of tyrosyl-trna synthetase from bacillus stearothermophilus using hybrid proteins

Pas de résumé disponible.