Identification des régions de la protéine pré-S du virus de l'hépatite B du canard impliquées dans la neutralisation virale

par Sylvie Chassot

Thèse de doctorat en Sciences. Biochimie

Sous la direction de Lucyna Cova.

Soutenue en 1994

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Lucyna Cova.

mots clés

• Virus de l'hépatite B
• Anticorps monoclonaux
• Déterminants antigéniques
• Immunogénétique

Résumé

Le mecanisme de neutralisation du virus de l'hepatite b humaine (vhb) est un phenomene mal connu et complexe qui impliquerait notamment les proteines pre-s et s, composantes de l'enveloppe de ce virus. Cependant, l'etude du role respectif de ces proteines dans la neutralisation est difficile en raison de l'absence de systeme de culture in vitro susceptible d'etre infecte par le vhb et de l'etroite specificite d'hote de ce virus. Pour pallier a ces difficultes, nous avons utilise un modele animal, le canard de pekin infecte par le virus de l'hepatite b du canard (dhbv). Le dhbv est tres proche du vhb tant par son organisation genetique que par son mode de replication. De plus, le canard infecte par le dhbv permet de disposer a la fois d'un systeme de culture in vitro et d'un modele animal in vivo. Ainsi, l'objectif de notre travail a ete d'etudier le mecanisme de neutralisation du dhbv. Afin de realiser une analyse topographique des etipopes pre-s intervenant dans la neutralisation de ce virus, nous avons tout d'abord produit des anticorps monoclonaux murins specifiques de la proteine pre-s/s du dhbv. Nous avons montre que deux de ces anticorps, 900 et sd20, neutralisent respectivement a 90% et a 75% le pouvoir infectieux du dhbv in vivo. Par ailleurs, la protection complete des canetons a ete obtenue avec un antiserum de lapin dirige uniquement contre les 131 premiers acides amines de cette proteine pre-s/s exprimes chez e. Coli (polypeptide dhbpre-s). En utilisant des peptides synthetiques partiellement chevauchants, nous avons montre que l'epitope interagissant avec l'anticorps monoclonal 900 se situe entre les aa 83 et 90 de la proteine pre-s/s du dhbv. Cet epitope se revele egalement reconnu par l'antiserum de lapin qui protege completement les canetons contre l'infection par le dhbv. Quant a l'epitope reconnu par l'anticorps monoclonal sd20, il a ete localise entre les aa 100 et 107 de la proteine pre-s/s du dhbv. Enfin, par des remplacements d'acides amines au sein de l'epitope reconnu par l'anticorps monoclonal 900, nous avons montre que deux residus de cet epitope, le tryptophane 88 et la glutamine 87, sont essentiels a son interaction avec l'anticorps monoclonal 900. Bien que, au sein de la region pre-s du dhbv, nous ayons identifie deux epitopes reconnus par des anticorps monoclonaux neutralisants, nous n'avons pas demontre si cette region est reellement impliquee dans la reponse immune chez le canard. Pour ce faire, nous avons etudie la reponse anti-pre-s chez des canards adultes immunises avec, soit du serum dhbv positif, soit le polypeptide dhbpre-s. Nous avons montre que la region pre-s de ce virus induit rapidement une reponse immune chez tous les canards immunises avec l'un ou l'autre antigene. Enfin, a l'aide de peptides synthetiques chevauchants, nous avons identifie cinq domaines antigeniques majeurs au sein de cette region pre-s. Le role de ces domaines dans la fixation du virus sur les hepatocytes est en cours d'etude

Titre traduit

Identification of the regions of the duck hepatitis b virus pre-s protein involved in viral neutralization

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