Recherche Avancée

Thèse soutenue

Études cinétiques et physiologiques d'une souche d'Escherichia coli recombinée surproductrice de glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase

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Auteur / Autrice : Anne Gschaedler
Direction : Joseph Boudrant
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biotechnologies et industries alimentaires
Date : Soutenance en 1994
Etablissement(s) : Vandoeuvre-les-Nancy, INPL
Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Laboratoire des sciences du génie chimique (Nancy)
Jury : Président / Présidente : Jean-Marc Engasser
Rapporteurs / Rapporteuses : Bernard Ehresmann, Henri Petitdemange

Résumé

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L’objectif général de ce travail est l'étude du comportement en fermenteur d'une souche d'E. Coli recombinée surproductrice d'une enzyme homologue, la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase. Dans une première partie, les performances de la souche ont été testées en culture discontinue et semi-continue en fermenteur de 2 litres. Une concentration optimum de glucose pour l'expression de l'enzyme et l'action inhibitrice de l'acétate ont été mis en évidence. Dans une deuxième partie, un milieu simplifié riche en acides aminés a été utilisé. Une étude de l'utilisation de ces derniers a été réalisée en culture discontinue et continue. Les transporteurs des différents acides aminés semblent jouer un grand rôle dans leur mode d'utilisation. Les acides aminés ont été classés en plusieurs catégories et l'influence du glucose sur leur importation a été dégagée. En utilisant ce même milieu de culture nous avons montré qu'il était possible d'augmenter fortement et de façon transitoire la production de l'enzyme recombinante par des ajouts pulsés, soit de glucose, soit de serine. Ce phénomène a été étudié en détail et en particulier la transcription et l'utilisation des promoteurs. La quatrième partie est consacrée à l'étude de la stabilité plasmidique. Nous avons mis en évidence une instabilité plasmidique transitoire en culture discontinue. En culture continue, la stabilité est meilleure à de faibles taux de dilution. Enfin, dans une dernière partie, nous avons étudié l'influence du plasmide et de la production de la protéine recombinante sur le comportement de la souche hôte en culture discontinue, semi-continue et continue