Études des propriétés d'une bactériocine anti-Listeria, biosynthétisée par une souche de Carnobacterium

par Florence Mathieu

Thèse de doctorat en Biotechnologies et industries alimentaires

Sous la direction de Gérard Lefebvre.

Soutenue en 1994

à Vandoeuvre-les-Nancy, INPL .

Les rapporteurs étaient Alain Deschamps, Georges Novel.

mots clés

• Toxine
• Activité biologique
• Bactericide
• Culture cellulaire mixte
• Carnocine
• Carnobacterium piscicola
• Toxin
• Biological activity
• Bactericidal effect
• Mixed cell culture
• Bactériocines -- Biosynthèse
• Microorganismes -- Croissance
• Listeria monocytogenes

Résumé

D’un fromage français de type brie, ont été isolées des souches identifiées à Carnobacterium piscicola. L’une des souches, C. Piscicola CP5, produit une bactériocine appelée Carnocine CP5. La croissance de la souche productrice est favorisée dans un milieu MRS dont le pH est régulé à 7. 0. Des le début de la phase exponentielle de croissance, la Carnocine CP5 est excrétée dans le milieu de culture. Elle n'est pas seulement active contre des espèces proches taxonomiquement mais aussi contre plusieurs souches d'Enterococcus et de Listeria spp. La Carnocine CP5 est inactivée par des protéases mais elle est relativement stable sur une gamme de pH de 2. 0 à 10. 0 ainsi qu'après un traitement thermique d'une heure à 100°C à ph 7. 0. Le poids moléculaire de la Carnocine CP5 a été estimé par filtration sur gel et par SDS-page. Des agrégats actifs de PM de l'ordre de 30 KDa peuvent être dissociées en plus petites sous-unités actives, de PM 3-4 KDa, sous l'action d'agents dénaturants, urée et SDS. Un protocole de purification de la Carnocine CP5 a conduit à l'obtention de deux pics d'activité. Sur l'un deux, une séquence partielle en acides aminés de l'extrémité N-terminale a été obtenue faisant apparaitre la séquence consensus-Tyr-Gly-Asn-Gly-Val-, présente chez d'autres bactériocines de bactéries lactiques a activité anti-listeria. Des mutants bac et sensibles à la Carnocine CP5 ont été obtenus après traitement de la souche CP5 par la novobiocine. Une bande d'ADN plasmidique PML6 est suspectée dans le déterminisme génétique de la production de la Carnocine CP5. L’action de la Carnocine CP5 ou de C. Piscicola CP5 sur L. Monocytogenes se caractérise par une adsorption, un effet bactéricide accompagné d'une lyse des cellules cibles

Titre traduit

Properties of an anti-Listeria bacteriocin produced by a Carnobacterium strain

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