Caracterisation fonctionnelle de deux motifs peptidiques conserves chez les methionyl-arnt synthetases procaryotes

par Emmanuelle Schmitt

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Sylvain Blanquet.

Soutenue en 1994

à Palaiseau, Ecole polytechnique .

mots clés

• Ligases
• ARN de transfert

Résumé

L'utilisation de la mutagenese dirigee et la caracterisation biochimique de variants du motif kmsks de la metrs d'e. Coli a permis de demontrer la participation de chacun des residus definissant cette sequence a la stabilisation de l'etat de transition conduisant a la formation du methionyl adenylate. De plus, nous montrons qu'un tel role dans la catalyse n'est possible que grace a un mouvement de la boucle kmsks au cours de la reaction. La reconnaissance specifique de l'anticodon methionine a ete abordee par une approche permettant d'isoler des metrs modifiees specifiquement dans la region 460, et devenues capables d'aminoacyler in vivo un arnt#m#e#t portant un anticodon non methionine. Cette etude a revele l'importance de deux residus aspartate (456 et 449) et du residu asn 452. La caracterisation biochimique de variants ponctuels de ces positions a permis d'aboutir a deux conclusions essentielles: 1) le residu asn 452 est indispensable a la reconnaissance de l'anticodon methionine. Son role se situe dans la stabilisation du complexe e:arnt; 2) la presence des residus aspartate en position 449 ou 456 est indispensable pour assurer le rejet des anticodons non methionine. Ces deux residus ne sont toutefois pas necessaires a l'aminoacylation de l'arnt#f#m#e#t sauvage. Ainsi, la reconnaissance de l'anticodon methionine au niveau de la region 460 met en uvre des determinants positifs (trp 461, asn 452) mais egalement des determinants negatifs (asp 449 et 456) necessaires a l'exclusion des mauvais substrats

Titre traduit

Functional characterization of two peptidic motifs conserved among procaryotic methionyl-trna synthetases

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