Thèse soutenue

Mise en évidence et clonage d'ADNc codant pour des petites protéines g chez pétunia hybrida
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Auteur / Autrice : Colette Jako
Direction : Bernard Teyssendier de la Serve
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biochimie biologie cellulaire et moléculaire
Date : Soutenance en 1994
Etablissement(s) : Dijon

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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L'étude des petites protéines g animales et de levure a montré qu'elles jouaient des rôles importants dans les mécanismes de sécrétion et de transduction des signaux. De telles protéines commencent à être connues chez les végétaux. Le but de cette thèse est de cloner et de caractériser des ADNc codant pour des petites protéines g chez pétunia hybrida. Dans une première partie, nous avons mis en évidence dans le plasmalemme de pétunia la présence de protéines reconnues par des anticorps dirigés contre des petites protéines g animales. Dans les mêmes échantillons, nous avons révélé cinq protéines capables de fixer du gtp radioactif. En seconde partie, nous avons isole un ADNc végétal codant pour une protéine présentant des homologies de séquence avec les petites protéines g animales. Nous avons essayé trois stratégies différentes: le criblage d'une banque d'ADNc avec un oligonucléotide, l'amplification par pcr avec une puis deux amorces spécifiques des séquences recherchées. Seules les amplifications avec deux oligonucléotides spécifiques nous ont donné un résultat positif. Ces réactions nous ont permis d'amplifier trois fragments d'ADNc de séquences différentes mais codant toutes trois pour des petites protéines g. Nous avons alors utilise deux des fragments isoles pour cribler une banque d'ADNc de feuille de pétunia. Ce criblage a donné, pour l'une des sondes utilisées, un ADNc complet. Cet ADN possède toutes les séquences caractéristiques des petites protéines g. La séquence protéique déduite de la séquence de cet ADNc présente de fortes homologies avec les petites protéines g de la famille ypt/rab. Nous avons montré que le gêne codant pour la protéine que nous avons isolée fait partie d'une famille de gênes. Nous avons ensuite mis en évidence une expression majoritaire de l'ARN codant pour cette protéine dans les fleurs de pétunia puis nous avons purifie la protéine et montre qu'elle était capable de fixer le gtp.