Etude de l'élément transposable bactérien IS911 : mise en évidence et caractérisation des facteurs nécessaires à sa transposition

par Patrice Polard

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de Olivier Fayet.

Soutenue en 1993

à Toulouse 3 .

mots clés

• Vecteurs de clonage
• Bactéries -- Cultures cellulaires
• Bactéries -- Biotechnologie
• Protéines -- Analyse
• Plasmides

Résumé

La sequence d'insertion is911 est un element transposable decouvert chez l'enterobacterie shigella dysenteriae. Elle appartient a la famille is3, qui rassemble actuellement le quart des sequences d'insertion bacteriennes. De taille voisine, elles presentent deux cadres de lecture juxtaposes, orfa et orfb. La caracteristique centrale qui rassemble ces elements est une forte similitude de la sequence proteique deduite du cadre de lecture majeur orfb. A ce critere unificateur s'ajoute l'identite de leurs bases terminales, invariablement formees du dinucleotide 5-ca-3. Les homologies majeures qui rassemblent les sequences d'insertion de la famille is3 ont ete retrouvees chez les retrovirus et les retrotransposons. Les proteines deduites des cadres de lecture orfb portent un domaine proteique d'une centaine d'acides amines retrouve dans l'integrase de ces retro-elements eucaryotes. Ces retro-elements se terminent tous par le dinucleotide 5-ca-3. Les proteines exprimees par is911 sont au nombre de trois. Deux d'entre elles, orfa et orfb, sont des produits independants d'orfa et d'orfb. La troisieme, orfab, est une fusion de ces deux proteines. Elle est issue d'un decalage de phase traductionnel programme. Orfab est la transposase de l'element. La transposition d'is911 ne serait pas replicative. D'un point de vue mecanistique, elle se rapprocherait de l'integration retrovirale. L'expression individuelle de la transposase s'accompagne de la circulation precise de l'element au niveau de ses extremites. Cette forme excisee d'is911 est le resultat d'une transposition intramoleculaire. Elle n'est pas observee lorsqu'orfab est exprimee avec orfa. De plus, cette proteine stimule la transposition intermoleculaire. Nous n'avons trouve aucun role a la proteine orfb. Les proteines orfa et orfab, mais pas orfb, se fixent specifiquement sur les extremites de l'element. L'ensemble de ces resultats ont permis de proposer un modele pour le deroulement de la transposition et de la circularisation d'is911

Titre traduit

The bacterial insertion sequence is911 : determination and characterisation of factors necessary for its transposition

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