Détection de toxoplasmes par amplification enzymatique d'un segment du gène rDNA. Mise au point. Optimisation analytique. Applications bio-cliniques : [thèse soutenue sur un ensemble de travaux]

par Jean Charles Cazenave

Thèse de doctorat en Microbiologie

Sous la direction de JP SEGUELA.

Soutenue en 1993

à Toulouse 3 .

mots clés

• Toxoplasmose -- Aspect génétique
• ADN -- Amplification
• Enzymologie clinique
• ARN polymérases
• Technique immunoenzymatique

Résumé

Afin d'ameliorer la sensibilite et la rapidite de la detection directe des toxoplasmes dans les liquides amniotiques, nous avons mis au point une technique pcr dont la cible est un fragment d'un des genes codant pour l'arn ribosomal (rdna). Il s'agit de genes naturellement amplifies puisqu'en copies multiples, ce qui augmente des le depart la sensibilite de l'analyse. Un produit d'amplification de 88 pb est obtenu. En pratique il est possible de detecter un seul parasite. Appliquee au diagnostic antenatal, cette technique a montre 10 liquides amniotiques positifs dans une serie de 80 patientes. Pour 70 d'entre elles, les resultats etaient negatifs pour toutes les techniques. La biologie ftale et les cultures conventionnelles montraient 8 cas positifs parmi les 10 depistes par la pcr. Les 2 derniers furent confirmes positifs a l'examen neonatal. Le resultat peut etre obtenu en moins de 24 heures et, compare avec les autres signes (biologie, echographie), permet un diagnostic beaucoup plus rapide de la toxoplasmose ftale. A ce jour, plus de 200 cas ont illustre la sensibilite et la specificite de cette technique. Dans le meme temps, nous avons pu montrer la presence d'adn toxoplasmique dans des echantillons d'humeur aqueuse (plus de 100 prelevements analyses). Le sang et le lcr de patients immunodeprimes ont egalement ete testes (plus de 200 echantillons a ce jour). La positivite de certains tests semble ouvrir de nouvelles perspectives pour l'etude physio-pathologique et le diagnostic de la toxoplasmose en particulier dans les cas de sida

Pas de résumé disponible.