Etude génétique et moléculaire du rôle de la protéine RecA d'Escherichia coli dans la recombinaison et la réparation mutagène SOS

par Christophe Cazaux

Thèse de doctorat en Toxicologie génétique

Sous la direction de Martine Defais.

Soutenue en 1993

à Toulouse 3 .

mots clés

• ADN -- Réplication
• ADN -- Altération
• Protéines de liaison
• Mutagenèse
• Recombinaison génétique
• Escherichia coli -- Génétique

Résumé

Certains agents xenobiotiques induisent chez la bacterie escherichia coli un ensemble de fonctions biologiques destinees au maintien de la survie cellulaire. Parmi celles-ci, la recombinaison post-replicative et la mutagenese sont conservees au cours de l'evolution et pourraient contribuer a la transformation maligne des cellules eucaryotes par activation des proto-oncogenes. L'enzyme reca d'e. Coli joue un role essentiel dans l'activation de la reparation mutagene induite sos de l'adn et dans la recombinaison genetique. Sa capacite de polymerisation explique en partie son extraordinaire versatilite. Nous avons cree par mutagenese dirigee huit mutations ponctuelles au sein du gene reca. La plupart de ces changements entrainent une alteration des activites recombinogenes et/ou mutagenes tant in vivo qu'in vitro. En outre, l'etude enzymologique des proteines mutantes purifiees a permis de detecter des deficiences dans la fixation de l'adn ou de l'atp, l'interaction avec les proteines ssb, le deroulement de la double helice de l'adn ou le clivage assiste du represseur lexa des fonctions sos. Des experiences de complementation genetique et biochimique entre l'allele reca sauvage et certains genes mutants nous permettent notamment de proposer un modele allosterique de regulation des fonctions de reca; les residus 204 et 207 font partie d'une boucle mobile l2 qui regirait la configuration spatiale de l'ensemble de la proteine et donc sa faculte de former des polymeres actifs ou inactifs. Il semble que la cellule contienne une forme inactive de stockage des proteines reca

Titre traduit

Genetical and molecular study of the involvement of the escherichia coli reca protein in recombination and sos repair

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