Réalisation d'une sonde endopolygalacturonase-or colloïdal et son application à la localisation des homogalacturonanes dans les parois de cellules d'hypocotyle de lin

par Armelle Cabin-Flaman

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Maurice Demarty.

Soutenue en 1993

à Rouen .

mots clés

• Hypocotyle
• Localisation
• Microscopie
• Marquage enzymatique
• Méthode analyse
• Paroi cellulaire
• Hypocotyl
• Localization
• Microscopy
• Enzymatic labelling
• Probe
• Analysis method
• Cell wall
• Lin
• Sondes moléculaires
• Marquage à l'or colloïdal (immunocytochimie)
• Immunocytochimie en microscopie électronique

Résumé

Un complexe enzyme-or colloïdal a été réalisé avec une endopolygalacturonase (masse moléculaire: 36000 daltons) purifiée à partir d'une préparation commerciale. La quantité minimale de protéine nécessaire à stabiliser des particules d'or (de diamètre moyen de 4,8 nm) est de l'ordre de 500 microgrammes/ml d'or colloïdal. Cette stabilisation est obtenue si le pH est de l'ordre de 5,9 (valeur supérieure à celle du point isoélectrique de l'endoPGH, pI: 4,45). Les différents paramètres intervenant dans la diffusion du complexe vers la molécule ont été étudiés en comparant les valeurs mesurées de densité de marquage (nombre de particules par unité de surface) à celles calculées par l'équation de Park et al. , (1987). La sonde ainsi obtenue est spécifique des blocs homogalacturonanes acides (non substitués). La localisation des blocs homogalacturonanes avec la sonde endo PGH-or colloïdal associée à l'utilisation des méthodes soustractives chimiques et enzymatiques, permet de visualiser une compartimentation de la paroi au cours de la croissance de l'hypocotyle de lin

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