Etude d'une serine protease de membranes plasmiques de foie de rat : approche biochimique et moleculaire

par JEAN NDUWIMANA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques

Sous la direction de André Le Treut.

Soutenue en 1993

à Rennes 1 .

mots clés

Résumé

Une serine protease de membranes plasmiques de foie de rat a ete obtenue par solubilisation de ces dernieres grace au sarkosyl. Elle a ete purifiee 520 fois par rapport aux membranes brutes a l'issue des differentes chromatographies realisees. Les analyses electrophoretiques ont montre l'enrichissement d'une proteine d'environ 30 kda a l'issue des differentes etapes de purification. Son marquage par le #3h-difp montre qu'il s'agit bien d'une serie protease. Le criblage d'une banque de cdna de foie de rat a ete realise par une sonde obtenue grace a des amorces degenerees correspondant aux sequences conservees autour des residus his et ser du site catalytique. Seize clones ont ete ainsi isoles et analyses. L'analyse des sequences des inserts de trois d'entre-eux, qui representaient des groupes de tailles et de profils de restriction differents a revele leur forte homologie avec l'haptoglobine, une proteine homologue aux serines proteases. Une autre approche a ete adoptee pour rechercher une sonde plus specifique. Ainsi, un fragment d'environ 150 pb a ete amplifie par pcr a partir de cdna simple brin grace a 2 amorces synthetisees l'une a partir de la sequence de l'extremite nh#2-terminale de la serine protease purifiee, l'autre a partir de la sequence conservee autour du residu his du site catalytique des serines proteases. Apres clonage dans le vecteur bluescript ii ks(+), ce fragment a ete sequence et analyse. Il sera utilise comme sonde pour cribler une banque de cdna de foie de rat

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