Etude de la pectine methyl esterase d'erwinia chrysanthemi souche 3937

par FRANCK LAURENT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Yves Bertheau.

Soutenue en 1993

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

Erwinia chrysanthemi est une bacterie phytopathogene responsable de pourritures humides. Ces symptomes sont dus a un ensemble de pectinases extracellulaires dont la pectine methyl esterase (pme). Le gene pem codant pour la pme de la souche 3937 a ete clone, sequence et caracterise. Il est constitue d'un cadre ouvert de lecture de 1098 pb, precede d'un site rbs, d'un promoteur et d'un site kdgr. Le produit du gene est une proteine de 366 aa dont 24 constituent une sequence signal. La forme mature presente un poids moleculaire de 36952 da et un point isoelectrique de 9,64. Par pcr, le gene pem a ete clone en amont du promoteur pl dans un plasmide a haut nombre de copies puis surexprime dans e. Coli. En fermenteur, cette souche produit 30-40 mg/1 de proteine, representant 5% des proteines totales de la bacterie, et dont 30% sont extracellulaires. La pme a ete purifiee par chromatographie d'affinite de substrat sur pectate reticule et ses proprietes biochimiques ont ete caracterisees. L'activite optimale est obtenue a ph 8-9, 50c, 50-100 mm nac1 ou 5-10 mm cac12 et sur une pectine esterifiee a 50%. La sequence peptidique a ete comparee a six autres pme d'origine bacterienne, fongique ou de plante. Six zones de forte homologie ont ete mises en evidence et sont supposees etre impliquees dans l'activite de la proteine. Une prediction de structure secondaire realisee par analyse des groupements hydrophobes fait apparaitre que le repliement de la pme n'est pas homologue a celui des proteines egz et pl, pourtant secretees par un systeme commun

Titre traduit

Study of the pectin methylesterase of erwinia chrysanthemi strain 3937

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