Mecanismes de la production d'anions superoxydes par les polynucleaires neutrophiles humains. Analyse par la starosporine, un inhibiteur de proteines kinases

Mechanisms of superoxide anion production by human polymorphonuclear neutrophils. Investigation with staurosporine, a protein kinase inhibitor

• Auteur / Autrice : Christophe Combadière
• Direction : Jacques Hakim
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Immunologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

La production d'anions superoxydes, ou explosion oxydative (eo), par les polynucleaires neutrophiles (pn) stimules par un facteur chimiotactique, resulte d'une cascade d'evenements biochimiques initiee par la fixation du facteur chimiotactique a son recepteur membranaire. Celui-ci, via une proteine g, transmet le signal a differentes phospholipases, generatrices de seconds messagers. Ceux-ci induisent l'activation de la proteine kinase c qui semble jouer un role important dans la stimulation des pn. L'objectif de mon travail vise a clarifier l'implication de la proteine kinase c (pkc) dans les mecanismes d'activation qui conduisent a l'eo, en utilisant notamment un puissant inhibiteur de pkc, la staurosporine. Dans la premiere partie, nous avons mis en evidence des effets opposes de la staurosporine sur l'eo induite par les facteurs chimiotactiques. Les traitements de courte duree induisent une inhibition alors que les traitements plus longs potentialisent cette reponse. L'inhibition et la potentialisation de l'eo sont associees a une inhibition et a une restauration de la phosphorylation de la p47 phox. Par contre, l'eo et la phosphorylation de la p47 phox induite par les activateurs directs de la pkc sont inhibees quelle que soit la duree du traitement des pn. Dans la deuxieme partie, nous avons caracterise de nouvelles proprietes de la staurosporine: sa capacite d'activer la phospholipase d et d'induire la redistribution des recepteurs aux esters de phorbol du cytosol vers la membrane. La staurosporine est un outil a double tranchant, capable d'inhiber la pkc mais presentant egalement des proprietes d'agoniste: activation de la pld et translocation de la pkc par des mecanismes qui pourraient etre independants de l'activation de la pkc. Elle nous a permis de reveler une nouvelle voie d'amorcage de l'eo. Cette molecule reste donc, malgre son absence de specificite, un outil de dissection des voies de signalisation cellulaire