Contribution a l'etude de la regulation de l'expression des cytokeratines au cours de la differenciation des epitheliums

par ALIX SENAT GAZEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de François Cuzin.

Soutenue en 1993

à Nice .

mots clés

Résumé

Les proteines de la famille des filaments intermediaires sont specifiques d'un type cellulaire donne. Parmi elles, les cytokeratines, toujours associees par paire, participent a la formation du cytosquelette des cellules epitheliales; par contre elles ne sont pas presentes dans les cellules mesenchymateuses. Pour etudier la regulation de leur expression, nous avons choisi de nous interesser tout particulierement aux cytokeratines endo a (k8) et k10 qui sont toutes les deux des marqueurs precoces, l'une de la differenciation de l'embryon, l'autre de la differenciation de l'epiderme. Nous avons etabli la sequence complete de la cytokeratine murine endo a (k8) et mis en evidence l'existence d'un promoteur alternatif situe a plus de 1 kb en amont du promoteur majoritaire. Nous avons egalement clone et sequence 1700 paires de bases d'un adn complementaire de la cytokeratine k10 humaine. Nous avons etudie le role de la methylation de l'adn d'une part, et l'effet de l'acide retinoique d'autre part, dans la regulation de l'expression de ces deux cytokeratines. Nous avons montre, en collaboration avec d'autres equipes, que bien que la methylation ne soit probablement pas le mecanisme physiologique de la regulation de l'expression d'endo a (k8), nous pouvions forcer l'expression de cette cytokeratine dans des cellules mesenchymateuses soit par l'effet d'un inhibiteur de la methylation, comme la 5-azacytidine, soit par transfection d'un adn demethyle codant pour cette proteine. Contrairement a la 5-azacytidine, l'acide retinoique induit la differenciation de cellules de carcinome embryonnaire en endoderme et par consequent la synthese d'endo a (k8), mais il est sans effet sur les cellules mesenchymateuses. Pour essayer de comprendre le role chez l'embryon de l'acide retinoique dans la differenciation des epitheliums et la synthese d'endo a (k8), nous avons produit des lignees de souris transgeniques qui hebergent une construction contenant l'element de reponse a l'acide retinoique du promoteur du gene rar en amont du promoteur tk et du gene lacz. L'expression de ce transgene dans plusieurs territoires de l'embryon, mais pas dans les epitheliums, nous a conduit a demontrer que le rare, contrairement a nos predictions, ne se comportait pas comme un element universel, mais qu'il etait reprime dans les tissus contenant l'isoforme l, comme l'epiderme

Titre traduit

A study of the regulation of cytokeratin expression during epithelial differentiation

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