7-alkylguanines et leurs dérivés fluorescents comme biomarqueurs d'exposition aux agents alkylants

7-alkylguanines and their fluorescent derivatives in probe dna' as markers of DNA-damaging potential in biological fluids

• Auteur / Autrice : Marie-José Durand-Thouand
• Direction : Paule Vasseur
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Toxicologie de l'environnement
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Metz

Mots clés

Mots clés contrôlés

Fluorimétrie

Alkylants

Marqueurs biologiques

Mots clés libres

7-alkylguanine

Immunoaffinité

Sucs gastriques

Nitrosation

Résumé

Les fluides biologiques comme les sucs gastriques peuvent contenir des substances génotoxiques ou leurs précurseurs qui joueraient un rôle dans le développement des cancers. Parmi ces composés se trouvent de nombreux agents alkylants. Les adduits majeurs produits par ces agents sont sur la position n7 de la désoxyguanosine de l'ADN. Ces adduits sont instables, l'ADN peut être facilement dépuriné pour donner les n7-alkylguanines correspondantes. De l'ADN de thymus de veau est incubé avec des sucs gastriques nitrosés chimiquement. Les 7-alkylguanines contenues dans le surnageant de dépurination de l'ADN sont détectées par mesure de la fluorescence après purification sur colonne d'immunoaffinité. La sensibilité de cette méthode étant insuffisante pour les applications biologiques. La dérivation des 7-alkylguanines par la phénylmalondialdéhyde a permis d'accroître leur fluorescence et de faciliter leur détection par spectrofluorimétrie

Biological fluids, such as gastric juice, often contain alkylating genotoxic substances which may paly a role in the aetiology of human cancer. The major adducts formed in DNA by most alkylating agents are 7-alkyldeoxyguanosines. These addcuts are labile and 7-alkylguanines are released by heating or enzyme repair. We have explored the possibility of using a probe DNA method - calf thymus DNA is incubated with nitrite-treated gastric juice, recovered and heated to induce depurination. The 7-alkylguanines are detected by direct fluorescence after an immunoaffinity purification, but with low sensitivity. 7-alkylguanines react with phenylmalondialdehyde to give derivatives with good HPLC-fluorescence properties. This method increases the detection sensitivity of 7-alkylguanine