Une endoprotéase acide de Myxococcus xanthus DK101 : purification de la protéine, clonage et séquençage du gène

An acidic endoprotease from myxococcus xanthus dk101. Protein purification : gene cloning and sequencing

• Auteur / Autrice : Nathalie Lucas
• Direction : Raymond Julien
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie. Biomembranes
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Limoges
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques

Mots clés

Mots clés contrôlés

Clonage

Caséine

Séquence nucléotidique

Gènes

Résumé

Un microorganisme procaryote social, myxococcus xanthus dk101, secrete preferentiellement en fin de phase exponentielle de croissance, une endoprotease, qui dans des conditions de ph acide, hydrolyse la caseine kappa avec une relative haute specificite. L'analyse des sequences n terminales des produits d'hydrolyse de deux substrats (caseine kappa, proteine tripartite recombinante) contenant la sequence cible habituellement reconnue par la chymosine, revele que l'enzyme bacterienne clive preferentiellement la liaison phe-met. Une activite de meme nature s'exprime au cours de la differenciation de m. Xanthus dk1622. Outre son role nutritionnel elle pourrait ainsi egalement etre impliquee dans la biologie du developpement de myxococcus. Purifie par des techniques de chromatographies classiques, la proteine presente une masse moleculaire apparente de 12 3 kda et un point isoelectrique de 4,5, 0,3. Deux amorces oligonucleotidiques deduites de la sequence des 37 premiers acides amines, complementaires d'une region sur le genome de m. Xanthus provoquent l'amplification par la reaction de polymerisation en chaine, d'un fragment d'adn genomique de 84 pb et a permis le criblage d'une banque genomique d'expression de myxococcus xanthus. Le plasmide recombinant isole renferme un insert de 2127 pb dont la sequence nucleotidique de ce dernier ne contient pas moins de 8 orfs dont une au moins possede les homologies attendues avec la sonde pcr. La sequence polypeptidique deduite de cet orf revele que l'enzyme mature est composee de 131 aminoacides avec une sequence en amont de 80 acides amines, ce qui pourrait suggerer que l'enzyme est synthetisee sous forme d'une proteine precurseur. Les resultats decoulant d'une analyse structurale (structure secondaire, sites fonctionnels. . . ) concernant la sequence nucleotidique deduite du gene etudie conforte l'hypothese d'une relation entre le gene et la proteine purifiee et l'existence d'un lien de parente structural et fonctionnel avec une endoprotease acide issue d'une autre myxobacterie: stigmatella aurantiaca dw4