Étude de l'organisation du génome par hybridation in situ fluorescente et imagerie microscopique interactive

Study of genome organization using fluorescent in situ hybridization and interactive cytometry

• Auteur / Autrice : Isabelle Leger
• Direction : Gérard Brugal
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Mots clés

Mots clés libres

Genetique des eucaryotes

Evolution biologique et moleculaire

Homme

Cytogenetique

Carte genetique

Carte physique

Methode

Hybridation moleculaire

In situ

Fluorescence

Interphase

Structure doigt zinc

Gene

Chromosome f19

Chromosome a1

Nucleole

Human

Cytogenetics

Genetic mapping

Physical map

Method

Molecular hybridization

In situ

Fluorescence

Interphase

Zinc finger structure

Gene

F19-chromosome

F19-chromosome

A1-chromosome

A1-chromosome

Nucleolus

Résumé

Les travaux presentes dans cette these s'integrent dans le projet europeen human genome; ils s'inscrivent plus precisement dans le contexte de l'analyse in situ de l'organisation du genome humain. Avec pour objectif de developper des approches originales de cartographie physique et fonctionnelle, nous avons mis au point des methodes d'analyse interactive d'images de sondes hybridees in situ adaptees a l'ordonnance lineaire de genes sur la molecule d'adn et a l'etude de la distribution de sequences genomiques dans le noyau cellulaire interphasique. Tirant profit des avantages du systeme home (highly optimized microscope environment) applique a la microscopie en fluorescence, sept genes codant pour des proteines en doigts de zinc ont ete ordonnes sur le chromosome 19 par cartographie interphasique. Si l'adequation du systeme home pour cette approche cartographique est confirmee, nous serons a meme de fournir une methode adaptee a la localisation precise et rapide de sequences specifiques sur le genome, rapprochant ainsi par un raccourci operationnel appreciable, les acquis de la genetique moleculaire et de la cytogenetique pour une connaissance cartographique acceleree du genome humain. Dans la perspective d'ouvrir de nouvelles voies d'investigation pour l'analyse des relations spatiales et fonctionnelles adn-proteines dans le noyau interphasique, nous avons developpe une technique combinant l'hybridation in situ de sondes fluorescentes et la detection immuno-cytochimique de proteines nucleaires. La co-localisation du centromere du chromosome 1 et des nucleoles a ainsi ete mise en evidence dans une lignee cellulaire de cancer du sein dont les caracteristiques genetiques avaient ete prealablement determinees par la cytogenetique interphasique. L'analyse interactive des images obtenues apres double marquage, nous a permis de documenter la signification fonctionnelle de l'association entre le chromosome 1 et les nucleoles