Contribution à l'optimisation de la micropropagation du manioc (Manihot esculenta Crantz) et application à sa transformation génétique par Agrobacterium tumefaciens

par N'da Koffi Konan

Thèse de doctorat en Agronomie

Sous la direction de Brigitte S. Sangwan-Norreel.

Soutenue en 1993

à Amiens .

mots clés

• Manioc
• Embryogenèse somatique
• Transformation génétique

Résumé

Des méthodes de culture pour optimiser la micro propagation du manioc ont été mises au point a partir de fragments de divers types d'organes chez plusieurs cultivars. La fiabilité de certains protocoles de régénération nous a conduit a explorer les possibilités d'obtention de plantes transgéniques de manioc par l'intermédiaire des agro bactéries. Les cotylédons, les embryons zygotiques et les massifs meristematiques inities sur les nœuds par incorporation de la bpa (10mg/l) au milieu ms, ont révèle d'énormes possibilités de régénération de plantes de manioc, par embryogenèse somatique ou par bourgeonnement. Les études effectuées pour la transformation génétique ont révèle que les massifs meristematiques axillaires et les embryons somatiques immatures, sont des explants favorables a la transformation. Des paramètres pour l'optimisation du processus sont discutes. Pour l'embryogenèse somatique, le 2,4-d a une concentration de 4mg/l, est l'hormone de croissance indispensable pour l'induction des embryons somatiques. Cependant, les fréquences de régénération sont très variables et dépendent du cultivar: le cultivar tems 30395 est celui qui donne les meilleurs pourcentages de régénération. L'efficacité du processus embryogénie peut être relativement rehaussée par l'addition au milieu ms de saccharose (3 a 4% p/v) en association avec 0. 5mg/l d'Aba. Les plantes ainsi régénérées présentent une morphologie et une teneur en ADN nucléaire identiques a celles des plantes témoins issues de bouturage ou de germination d'embryons zygotiques. La bpa (0. 5mg/l) incorporée au milieu ms est la seule phytohormone favorable a l'induction de bourgeons. La prolifération de bourgeons axillaires et/ou adventifs et leur enracinement peuvent s'obtenir en associant l'ana (0. 01 - 1mg/l) a la bpa. Les embryons somatiques immatures sont aussi une source idéale pour la production de bourgeons

Titre traduit

Contribution to the optimization of micropropagation in cassava (manihot esculenta crantz) and application to genetic transformation via agrobacterium tumefaciens

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