Transformation et transposiiton chez une souche de Salmonella typhimurium TA1538 : contribution à la mise au point d'un salmonella/multitest pour la détection des agents génotoxiques

par Michèle Gentil

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et microbiologie

Sous la direction de Gérard Duménil.

Soutenue en 1993

à Aix-Marseille 2 , en partenariat avec Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (autre partenaire) .

mots clés

• Salmonella typhimurium
• Transformation génétique
• Génotype

Résumé

Les principaux tests courts de genotoxicite utilisant des cellules procaryotes presentent certaines limites. Afin de completer cette batterie de tests, il serait interessant de realiser un test d'induction lytique avec une des souches d'ames: salmonella typhimurium ta1538 (delta uvrb, hisd3052, rfae) lysogene pour le bacteriophage fels2. Pour cela, il serait avantageux de construire, par la technique de fusion de genes ou d'operons, une souche avec laquelle l'induction lytique pourrait etre suivie par un dosage de la beta-galactosidase (par reference au biochemical induction assay). Dans cette optique, ce travail consistait en la mise au point des conditions experimentales permettant d'adapter a la souche ta1538 la technique de construction des fusions de genes ou d'operons a l'aide de transposons. Le vecteur de transposon le plus utilise etant le phage lambda, nous avons rendu cette souche sensible a ce phage par transformation avec le plasmide pamh70 (lamb#+, nusa#+) qui confere aussi une resistance a l'ampicilline. En raison du genotype rfae de la souche ta1538, des transformants n'ont pu etre obtenus que par electroporation. Les conditions de transformation ont ensuite ete optimisees en appliquant la methodologie experimentale a l'electroporation. Par la suite, la mise au point des conditions experimentales de transposition a egalement pose un probleme en raison de la faible stabilite du plasmide pamh70 dans la souche ta1538. En effet, la pression de selection adoptee (150 microgrammes d'ampicilline par millilitre) pour maintenir ce plasmide dans salmonella typhimurium lb5010 s'est revelee insuffisante pour la souche ta1538. Des clones de transposition ont alors ete isoles avec les phages lambda placmu en modifiant la concentration en ampicilline des milieux de culture utilises

Titre traduit

Transformation and transposition in Salmonella typhimurium TA1538 strain: contribution to the development of a salmonella/multitest for genotoxicity testing

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