Etude de l'élément transposable bactérien IS1 : mise en évidence de la protéine impliquée dans la réaction de transposition

par Jean-Michel Escoubas

Thèse de doctorat en Microbiologie. Biologie moléculaire

Sous la direction de Mick Chandler.

Soutenue en 1992

à Toulouse 3 .

mots clés

• Biologie moléculaire
• Procaryotes
• Chromosomes -- Cartes
• Recombinaison génétique
• Transposons

Résumé

La sequence d'insertion is1 est composee de deux sequences inversees repetees (29 pb) situees de part et d'autre de deux cadres de lecture chevauchants (insa et insb). Ces cadres de lecture sont transcrits, sous forme d'un arnm polycistronique, a partir du promoteur pirl. Le gene, insa, produit une proteine affine pour l'adn se fixant de facon specifique sur les extremites inversees repetees. Elle joue un role de represseur dans la transposition. Le produit du deuxieme gene, insb, n'a pu etre detecte et aucune proteine susceptible d'assurer les fonctions de transposition n'avait ete mise en evidence. La caracterisation du mode de production de la transposase et l'etude du controle de l'activite d'is1 ont ete les deux axes directeurs de nos recherches. Nous nous sommes tout d'abord attaches a montrer que la transposase est le produit d'une fusion traductionnelle entre les deux genes d'is1 effectuant selon un mecanisme deja decrit chez les retrovirus. Pour cela nous avons mis en evidence la production d'une proteine (insab) issue de la fusion traductionnelle des cadres de lecture insa et insb. La production constitutive de cette proteine s'accompagne d'une tres forte augmentation de la frequence de transposition de l'element. Nous avons egalement montre que la mobilisation d'is1 est regie par le rapport entre la transposase et le represseur, et non par la quantite absolue de transposase. Nous avons elabore une nouvelle famille de vecteurs plus appropries a l'etude de la transposition d'is1. Ces plasmides nous ont permis de confirmer que la sur-transcription des cadres de lecture d'is1 est sans effet sur son activite de transposition. Par ailleurs, nous avons montre que la surproduction de transposase est toxique pour la cellule. Enfin, des resultats recents montrent que, dans certaines conditions (surproduction de transposase), la presence des deux extremites de l'element n'est pas indispensable a la transposition d'is1

Titre traduit

Study of the bacterial transposable element is1: characterization of the protein involved in the transposition reaction

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