Etude structurale et fonctionnelle du domaine catalytique de la poly(adp-ribose) polymerase humaine

par FREDERIC SIMONIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées

Sous la direction de Gilbert de Murcia.

Soutenue en 1992

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008) .

mots clés

Résumé

La poly(adp-ribose) polymerase est une enzyme nucleaire associee a la chromatine. En presence de nad comme substrat elle catalyse la polymerisation de residus adp-ribose en un homopolymere branche (le poly(adp-ribose)) et l'attachement de ce polymere a des proteines nucleaires acceptrices ainsi qu'a elle-meme. Son activite est dependante de la presence de coupures simple et double brin dans l'adn. Dans un premier temps, nous avons mis au point un systeme permettant de visualiser sur nitrocellulose l'activite de l'enzyme ainsi que celle des peptides conservant le site actif. L'analyse par cette technique de proteines tronquees realisees a partir du cdna et produites dans e. Coli nous a permis de trouver un fragment minimal de la poly(adp-ribose) polymerase conservant une activite catalytique. Par la suite nous avons initie une etude de ce domaine par mutagenese dirigee. Parallelement nous avons purifie en grande quantite le domaine catalytique produit dans e. Coli ainsi que l'enzyme entiere produite dans des cellules d'insectes en vue d'une etude cristallographique

Titre traduit

Structural and functional study of the catalytic domain of human poly(adp-ribose) polymerase

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