Effet de la sequence chi sur les replicons cercle roulant

par Patrick Dabert

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alexandra Gruss.

Soutenue en 1992

à Paris 11 .

mots clés

Résumé

L'insertion d'un fragment d'adn etranger dans un plasmide se repliquant par un mecanisme de cercle roulant (plasmide rcr) conduit frequemment a l'apparition de multimeres plasmidiques lineaires de haut poids moleculaire (hmw). Ce phenomene, qui semble particulier a ce type de replicons, s'observe dans de nombreuses especes bacteriennes gram-positives ou gram-negatives. Les travaux presentes ici concernent la caracterisation des facteurs intervenant dans la production de hmw chez escherichia coli. Ils indiquent que l'accumulation de hmw s'observe dans deux circonstances: (i) lorsqu'on etablit un plasmide rcr dans une souche depourvue de l'exonuclease cellulaire recbcd, ou (ii) lorsqu'on insere la sequence chi (ou un fragment d'adn contenant chi) dans un plasmide rcr etabli dans une souche rec#+. Dans ce dernier cas, la production de hmw depend de la reconnaissance de chi par recbcd. Des experiences au cours desquelles l'activite exonucleasique de recbcd est inactivee, puis restauree, demontrent qu'une succession de sequences chi protege les hmw de la degradation par cet enzyme. Nous proposons que les hmw soient produits lorsqu'un plasmide rcr ne termine pas sa replication, mais qu'ils soient normalement degrades par l'exonuclease cellulaire recbcd. Leur accumulation dans la cellule ne deviendrait possible que lorsque recbcd est inactive par des mutations ou inhibe par la presence de la sequence chi sur le plasmide. Ces resultats constituent la premiere confirmation moleculaire, in vivo, du role de la sequence chi dans l'inhibition de la fonction exonucleasique de recbcd. Ils suggerent que le premier role de cette sequence serait de proteger l'adn chromosomique de la degradation par recbcd lors de cassures survenant dans le chromosome. L'utilisation des plasmides rcr comme outil permettant la caracterisation des sequences chi presentes dans d'autres organismes est discutee a la fin de ce manuscrit

Titre traduit

Chi effect on rolling circle replicon

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