Cytogenetique en flux : etude du caryotype de porc et detection des centromeres

Flow cytogenetics: study of the swine karyotype and centromere detection

• Auteur / Autrice : Annette Schmitz
• Direction : Gérard Frelat
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Génétique des eucaryotes, évolution biologique et moléculaire
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Dans la premiere partie de ce travail, nous presentons le caryotype en flux biparametre du porc obtenu par cytometrie en flux double laser. Les 19 paires chromosomiques du caryotype de porc sont resolus en 15 a 18 pics. Nos resultats conduisent a la definition d'un caryotype en flux moyen de l'espece. La detection d'une translocation (t(3 ;7) et la caracterisation d'une lignee lymphoblastoide de porc (l 52) ont ete realisee sur cette base. Le developpement d'une methode d'interpretation analytique du caryotype en plux a conduit a la quantification de l'adn des chromosomes porcins (en mb) et a l'estimation de leur locatlisation sur le caryotype en flux. La verification des localisations chromosomiques a ete realisee par pcr sur chromosomes tries. Le chromosome 7 a ete identifie par pcr avec des amorces specifiques des genes tnf a et cyp 21 porcins. Une methode pcr aleatoire, parm-pcr, a permis de produire des sondes specifiques de tous les chromosomes porcins resolus sur le cayotype en flux. L'utilisation de ces sondes en hybridation in situ pour la peinture chromosomique aboutit a l'interpretation complete du caryotype en flux biparametre de porc. Dans la deuxieme partie, nous developpons une methode d'immunomarquage des centromeres grace a des serums de patient atteints du syndrome de crest. Ce nouveau parametre d'analyse des chromosomes en cytometrie en flux doit permettre d'estimer le pourcentage de chromosomes dicentriques dans une suspension chromosomique